第六、七章植物细胞及原生质体培养课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * A-E, 培养的欧当归(Levisticum officinale Koch)原生质体分裂再生成植株的过程 F-L, 培养过程的核变化；F.多核，G.核穿壁，H.无丝分裂，I.染色体桥，J. 2n=22，K.L.多倍体. 二、原生质体融合： 在外界因素作用下，两个或两个以上植物细胞合并成一个多核细胞的过程称为植物细胞融合，或植物体细胞杂交。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁，不能直接融合，需经酶消化除去细胞壁释放出原生质体，后者生理、生化及遗传学特性与完整细胞基本相同。在适当条件下来源不同的植物原生质体可产生融合作用，并可再生细胞壁，形成完整植株。 1、作用： (1) 可实现远缘杂交，获得种间杂种，克服有性杂交配子不亲合性或有性生殖障碍植物的种间杂种； (2) 可获得含另一亲本非整倍体杂种或胞质杂种，且获得的遗传变异范围极广； (3)一次操作可实现两个以上亲本的融合作用 (4) 可获得呈现双亲个体基因型总和的杂种； 2. 促融因素： （1）NaNO3诱导， NaNO3 可中和原生质体表面负电荷，促进原生质体聚集，对原生质体无损害，但融合率低； （2）高Ca2＋和高pH值诱导； （3） PEG（聚乙二醇）诱导，在高浓度PEG溶液中，原生质体发生聚集作用，经稀释后，50％以上原生质体发生融合作用； （4） 高Ca2+、高pH值及PEG结合诱导法。 （5） 其他如葡聚糖硫酸酯、聚乙烯醇及电场诱导等融合方法。 融合过程： 高密度混合2×105个/ml 3. 影响融合的因素： PEG, 高Ca2+ 高pH处理时间。 4. 杂种细胞的筛选： （1）遗传互补筛选/抗性互补筛选 （2）机械筛选 天然颜色/荧光素标记 5、杂种植株的选择：可利用形态、细胞、生化及分子手段鉴定 思考题： 1、有关名词解释 2、简述分离细胞的方法。 3、单细胞培养的基本方法有几种？ 4、简述植物原生质培养及细胞融合的作用。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * C. 连续培养(Continuous culture): 是用一定容积的非密闭系统进行细胞培养的方法，在培养过程中不断注入新鲜培养基，而使营养物连续得到补充，细胞生长和增殖连续进行，同时有等体积的培养物排除系统。 分为封闭型和开放型（恒浊、恒化培养）连续培养两种。 恒浊培养 恒化培养 （三）优良悬浮培养体系要求： A. 悬浮培养物分散性好，细胞团较小，一般由几十个以下的细胞组成。 B. 均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同。 C. 生长迅速，悬浮细胞的量一般2—3天甚至更短时间便可增加一倍。 三、细胞培养的特性： 　1. 植物细胞较微生物细胞大，具有纤维素细胞壁，抗剪切力差； 2. 细胞生长速度慢，易受微生物污染，有时需用抗生素； 3. 细胞生长的中期及对数期，易凝聚为直径达350 um一400 um 的团块，悬浮培养较困难； 4. 培养时需供氧，培养液粘度大，不能耐受强力通风搅拌；并具有群体效应 5. 培养细胞产物滞留于细胞内，且产量较低，培养过程具有结构与功能全能性。 1 　四、 植物细胞培养的营养需求及培养基 　１. 营养需求： 植物细胞生长所需营养较微生物细胞复杂，除水分外，其它营养成分可分为如下几类： (1) 无机营养: 如N、 P、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn、B、Mo、I等； (2)维生素：如维生素B1、B6、烟酸、肌醇、生物素、泛酸钙及叶酸等； (3) 碳源: 如蔗糖、葡萄糖、木糖、甘露糖及山梨醇等； (4)天然物: 如水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰乳、酵母提取液、香蕉汁、荸荠汁、生梨汁及苹果汁等； (5) 植物激素: 如生长素 、赤霉素、细胞分裂素 、脱落酸；其它有油菜素内酯、三十烷醇、肽类、半支莲醇、月光花素、石蒜素、玉米素等； (6)氨基酸类: 如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、丝氨酸、赖氨酸、亮氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、组氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、苏氯酸、苏氨酸、酪氨酿、精氨酸、丙氨酸及半胱氨酸等； (7) 核酸及其水解物: 如DNA、RNA、黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤及胸腺嘧啶等； (8) 其它成分: 如氯化胆碱、胆质素、胶氨酸、苹果酸及反丁烯二酸等. 2. 培养基： (1)固体培养基：添加琼脂等