进展期胃癌组织中EGFR及PI3K表达及相关性.doc

进展期胃癌组织中EGFR及PI3K表达及相关性【摘要】 目的 研究EGFR和PI3K表达的相关性，以及与进展期胃癌临床病理的关系。方法 采用免疫组织化学法检测68例进展期胃癌组织EGFR和PI3K的表达情况，并分析其与胃癌临床病理的关系。结果 EGFR表达阳性率为5882%(40/68)，与淋巴结转移、远处转移及临床TNM分期有关(P60岁21例。男45例，女23例，男女比例196∶ 1。按WHO分类标准高分化腺癌19例，中低分化腺癌49例。有淋巴结转移46例，无淋巴结转移22例。按照AJCC(第7版)胃癌分期系统，Ⅱ期22例，Ⅲ期30例，Ⅳ期16例。并选择同期胃溃疡病例正常胃切除标本15例作为对照组。标本取材大小05 cm×10 cm×05 cm，组织标本用10%甲醛固定。所有患者术前均未接受放化疗。 12 试剂与方法 EGFR鼠源性人单克隆抗体和PI3K鼠源性人单克隆抗体由福州迈新生物技术公司提供。采用免疫组织化学SABC法，具体操作步骤如下：石蜡切片逐级脱蜡至水，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶10 min，高温高压热修复，2%牛血清封闭20 min，滴加一抗(EGFR稀释浓度为1∶ 100；PI3K稀释浓度为1∶ 50)，湿盒内4℃冰箱孵育过夜后滴加二抗，室温20 min，滴加辣根酶标记的链霉素，DAB显色，脱水，透明，封片。结果判定后再进行苏木素复染细胞核。以磷酸盐缓冲液(PBS)替代第一抗体作为阴性对照。 13 评定标准 由两位有临床经验的病理科医生对免疫组化结果进行判读。EGFR和PI3K阳性染色均为淡黄色、棕黄色或棕褐色，定位于细胞质或细胞膜。采用二级计分法，根据细胞染色程度分类：无着色为0分，淡黄色为1分，黄或棕黄色为2分，棕褐色为3分；根据阳性细胞所占5个以上高倍视野比例计数分为5类：5%以下为0分，6%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为3分，76%以上为4分。根据二者乘积判断阳性等级：0分为阴性()，1~4分为弱阳性(+)，5~8分为中度阳性(++)，9~12分为强阳性(+++)。 14 统计学方法 所有数据均采用SPSS 130统计软件处理，样本率的比较使用χ2检验，相关性用Spearman 等级相关分析，以P005)。见表1。 22 EGFR和PI3K表达的相关性分析 52例PI3K表达阳性胃癌组织中有25例EGFR表达阳性，阳性率为4808%，16例PI3K表达阴性病例中有3例EGFR表达阳性，阳性率仅为1875%，PI3K表达阳性胃癌组织中EGFR阳性表达明显高于PI3K阴性者(P005)，即二者在进展期胃癌组织中表达同时阳性的百分率较高，表明二者在进展期胃癌中有共同表达现象。Spearman 等级相关分析表明，进展期胃癌组织中EGFR表达和PI3K之间具有显著相关性(P005)。 3 讨论 表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)广泛表达于表皮细胞和基质细胞、部分神经胶质细胞和平滑肌细胞，在调节细胞生长和组织修复中起十分重要的作用。EGFR是受体型酪氨酸蛋白激酶，它与相应配体结合以后，主要通过PI3K通路将信号传入细胞核，从而调节细胞的生长和分裂，进而引起肿瘤细胞增殖、增加新生血管生成、促进肿瘤浸润和转移。因此，高水平EGFR反映了肿瘤的高增殖、高恶性度、高术后复发率及预后不良。近年来，多篇文献［28］报道EGFR在胃癌组织中存在过度表达，过度表达率基本在40%~65%之间，而对照组［3,4］正常胃黏膜组织中EGFR无阳性表达，阳性率为零。据此可以确定在正常胃组织中EGFR的表达很低，而在胃癌组织中存在着过度表达。本研究EGFR在胃癌组织中的表达率为5882%(40/68)，其过度表达率明显高于正常胃组织，且与肿瘤的淋巴结转移、远处转移和临床TNM分期有关。因此，EGFR过度表达可作为判断胃癌预后不良的重要指标。 磷脂酸肌醇3激酶(PI3K)是由Sugimoto等于1984年发现的一种胞内磷脂酰肌醇激酶，是磷脂激酶家族中的一个重要成员，具有脂类激酶活性和蛋白激酶活性，通过多种途径进行与细胞生长及存活有关的信号传导。国内外研究发现PI3K在卵巢癌［9,10］发生、发展中起重要作用。PI3K是T淋巴细胞内重要的信号传导分子，通过激活下游底物蛋白激酶B(Akt)介导的信号传导通路，具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进骨架蛋白重排、促进细胞间粘附等功能。本研究PI3K在进展期胃癌组织中表达率为7647%(52/68)，呈过度表达特征，明显高于正常胃组织，差异有显著性，提示PI3K的高表达与胃癌的形成及进展有关。 本实验研究了进展期胃癌组织中EGFR和PI3K表