制药分离工程第十一章_色谱分离过程.ppt

项 目 高效液相色谱法 经典液相色谱法 色谱柱：柱长/cm 柱内径/mm 10～25 2～10 10～200 10～50 固定相粒径/μm 5～50 75～600 色谱柱柱效 （理论塔板数） 2×103～5×104 2～50 柱压降/MPa 5～15 0.001～0.3 进样量/g 10-6～10-2 0.1～10 分析时间/h 0.05～1.0 1～20 2 HPLC的特点 * 与气相色谱法相比 不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广； 可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高； 一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。 HPLC的特点（二） 项 目 高效液相色谱法 气相色谱法 进样方式 样品制成溶液 样品需气化或裂解 流动相 溶液 惰性气体 分离原理 吸附、分配、筛析、亲和等 吸附和分配 检测器 UVD、PDAD、RID等 TCD、FID、ECD等 应用范围 低、中、高沸点有机化合物 离子型无机化合物 热不稳定化合物 生物活性分子 低沸点有机化合物 永久性气体 * 高效液相色谱仪 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统 检测系统 数据记录处理系统 3.1　高效液相色谱仪构造 检测器简介（一） ◆　紫外吸收检测器（UVD） 原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓度的检测器。它具有波长固定，波长可变和光二极管阵列三种类型。 特点：选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高（10-9g）。 ◆　折光指数检测器（RID） 原理：监测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测量试样浓度的检测器。 特点：通用性检测器，温变化要保持在±0.001℃、灵敏度低（10-6g）。 检测器简介 ◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。 ◆ 荧光检测器（FLD） 原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光）的性质检测。 特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。　　　　　　　　　　　　　　　　　 检测器简介 ◆ 蒸发光散射检测器（ELSD） 原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气（氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。 特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏度高，是通用型检测器。 色谱柱简介 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2）和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯甲烷等。 反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。 * HPLC 色谱柱的构成 类 型 内径D (cm) 柱长(cm) 粒径 (μm) 分 析 柱 0.3 – 0.46 3 - 25 3 - 10 微 孔 柱 0.1, 0.21 15, 25 3 - 8 半制备柱 0.8 – 1.0 10 - 25 5 - 20 制 备 柱 2.0 – 5.0 10 - 25 5 - 20 * 现代高效液相色谱柱的要求 超纯 B 型球形硅胶 —— 峰形好、柱效高。 不能有使色谱性能降低的直径小于50 ?的微孔。 粒径尺寸从 3 μm 到 10 μm ——能满足从分析到制备色谱规模的需求。 色谱柱柱床装填好 —— 使用寿命长、柱效高。 封尾彻底 —— 峰形好、使用寿命长。 批与批之间得重现性好。 不同的相具有不同的选择性 —— 能更好的实现分离 键合相化学稳定好 —— 适用的 pH 范围广, 使用寿命长。 * Thank you!!!!! * 作业 P277 8-6; p278 9-1; p279 10-2; p279 11-4; 11-16. 2. 通过上网搜索相关产品的信息，试比较UPLC与HPLC两种 仪器，说明UPLC其优点在哪些地方？(从各种技术参数的角