小片段RNA在基因沉默中的作用(翻译版).docVIP

小片段RNA在基因沉默中的作用 Peter M.Waterhouse, Ming-Bo Wang and E. Jean Finnegan 摘要：最新的研究已经揭露了在植物和低等真核生物中存在着一种简单的的保护机制。这种机制，在植物细胞中转录后水平的基因沉默的形式存在，它的作用是RNA特异性序列的降解。它是由双链RNA介导合成的，这个dsRNA与一段长为21-25ntRNAs的产物有关，并且能够通过扩散信号在植物体内扩散。这个小片段RNA互相缠绕，它不仅能够指导核酸酶复合体降解mRNA，同时能够指导甲基化酶复合体使沉默基因的DNA甲基化。这也同时表明：这些小片段RNA可能是移动的沉默信号，这种观点在最近被提出。 在植物细胞中，转录后水平的基因沉默的作用机制是探测细胞中的RNA并且特异性的降解那些被认为是外来的RNA。外来RNA可以形成双链分子或者单链分子并且能够与植物细胞中的双链RNA呈现同源性。大多数植物病毒拥有能够复制产生正义和反义RNA的RNA基因组,并且在细胞中它拥有形成双链的潜力，因此，这些RNA既是植物细胞防御机制的诱导物，同时也是靶目标。内源基因序列的转基因编码双链或者发卡RNA高度有效的参与指导的内源mRNA为目标的细胞降解机制，因此这样就提供高效的、定向的基因抑制。这一发现使得转基因植物不能独立针对病毒的防御机制得到增强。这也同时揭示了反式失活和共抑制是怎么运作的：通过反向重复定位的转基因的两份拷贝的随意结合，例如从一个基因到相邻的拷贝转录产生的带有发卡结构的RNA的通读。 只是在植物细胞中观察到具有与转基因序列同源性的大约25nt RNAs发生基因沉默的现象时，这时小片段RNA与转录后水平的基因沉默的相关性才被发现。这些小片段RNA表现为与转基因序列相同或者互补。进一步的研究表明在植物体内这些小片段RNA始终与PTGS有关。 当在果蝇的RNAi发现相似长度的dsRNAs变成一个整体的时候，这些小片段的正义和反义RNA的相关性变得很明显。RNAi是一种在植物体内绝大部分与PTGS存在相似性的一种机制。当与ssRNA具有相同序列的dsRNAs转入细胞器时，靶ssRNA被特异性的降解。dsRNAs首先被一种称作Dicer的类似 RNAseIII的核酸内切酶切割成为大约22nt dsRNAs的小片段，然后这些小片段的dsRNAs作为一种核酸酶复合体切割与它具有序列同源性的ssRNA。 如图: 果蝇的RNAi干扰机制（a）和植物PTGS（b）。在RNAi（i）中，外源dsRNA被特定蛋白质识别(ii)，然后从dsRNA的末端切割成大约22nt 的特定长度和结构的小片段RNA(iii)，并形成核蛋白复合体 (iv)。小片段dsRNA的双链分开，其中一条链用来识别互补序列的ssRNA(v).每个复合体在接近引导序列的中间位置切割ssRNA。PTGS在植物中，起到是一种类似RNAi切割机制的作用。首先PTGS的起始因子dsRNA是由RNA 病毒复制机制、源于转基因的双向克隆形成的发夹 RNA( hpRNA) 产生的。然后，被切割后的小分子RNA或者没被切割的dsRNA进入核仁指导methyltransferase complex（甲基转移酶复合体）序列甲基化：同时，扩散到其它细胞指导同源ssRNAs的切割。关于病毒沉默抑制作用的可能性观点认为：通过p25蛋白和HC-Pro实验证明p25能够阻止移动PTGS信号的传播，但是不能抑制现有的PTGS，HC-Pro是一种病毒沉默抑制器。 PTGS能够通过植物大分子的运输系统进行系统性的扩散 PTGS的一个显著特征是它的非细胞独立性。植物中出现转基因沉默的植株嫁接到另一没有基因沉默的转基因植株中同样可以通过信号诱导PTGS。例如，将带有GUS基因表达标记的新的幼枝嫁接到具有GUS基因标记检测出PTGS的主根上时，渐渐的在的转GUS基因的幼枝上渐渐表出PTGS。这个信号似乎具有序列特异性，并且能够从主干到幼枝的单向性移动。它可以在野生型植株的茎干上至少移动30cm，在具有GUS基因标记的主干和幼枝组织上进行转嫁。通过农杆菌属渗透感染，具有相同特性的信号也可以从花瓣上瞬时传递PTGS到植物其它没有被感染的部分，其它部分也表现出沉默构建。报道基因，内源基因或者病毒基因外源基因的整合基因可以产生系统性沉默信号。 为了解释说明信号的特异性，有人认为这个信号至少包含了转基因产物的一部分，很有可能以RNA的形式。另外一种观点认为内源RNA在植物细胞间长距离的传播是具有争议性的，但是这种RNA的不是绝无仅有的。大部分病毒是RNA病毒，当塔门感染寄主的是时候，它们的RNA同时也贯穿到植物细胞中。这是一种由病毒编码的动力蛋白的介导作用引起的，但是