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常见嗜尸性昆虫DNA提取方法的研究进展 【摘要】近年来，随着法医昆虫学的迅速发展，嗜尸性昆虫因其在死亡时间推断，特别是腐败尸体死亡时间推断等方面具有无可比拟的优越性，越来越受到人们的关注。针对嗜尸性昆虫进行分子水平的研究，既可以弥补其形态学由于样本损坏活鉴别特征不明显而延误法医鉴定的不足，并可以对各阶段的幼虫进行DNA提取而节省时间。目前法医昆虫学中主要应用限制性片段长度多态性（RFLP）、DNA随机扩增多态性（RAPD）和DNA序列分析等技术对嗜尸性昆虫进行分子水平研究。因此，如何提取高纯度、高浓度的DNA成为嗜尸性昆虫分子生物学研究的重要问题之一。本文就近年来文献报道的各种嗜尸性昆虫DNA提取方法进行综述。 【关键词】法医昆虫学；嗜尸性昆虫；线粒体DNA；DNA提取 Study on the mitochondrial DNA extracting methods for Common sarcosaphagous insects 【Abstract】With the development of forensic entomology, Sarcosaphagous insects have been paid much attention to for the analogous advantage in the estimation of the postmortem interval (PMI) and other questions of forensic relevance. Study on the Sarcosaphagous insects at the molecular level, could either make up the deficiency by using the morphologic feature, or save time by extracting DNA from immature insects. Recently, restriction fragment length polymorphism（RFLP）, Random amplified polymorphic DNA（RAPD）and DNA sequencing are mainly applied. As a result, extracting DNA of high purity and concentration becomes one of the most important problems in forensic entomology. The paper expounds different DNA extraction methods reported in recent years systematically. 【key words】forensic entomology; Sarcosaphagous insects; mitochondrial DNA; DNA extraction 嗜尸性昆虫的种类 根据嗜尸性昆虫的食性特点主要分为四类：(1)尸食性昆虫包括双翅目的蝇类和鞘翅目中的甲虫等，是法医学中最重要的一类，主要以尸体组织为食，测定这些昆虫的日龄常可作为死亡时间推断的依据。(2)杂食性昆虫如膜翅目的蚁类、蜂类等，以尸体为食，也可以取食尸源性蝇类，如此类昆虫数量过多，将导致尸食性昆虫的减少，以致延缓尸体腐败的速度。(3)寄生类昆虫如某些螨类。(4)其他类昆虫如蜚蠊目中的蜘蛛、蟑螂，重足目中的蜈蚣等[1]，它们从平常的生活环境扩散而来，为寻找水分或停息场所而偶然抵达。 嗜尸性昆虫DNA抽提方法介绍 DNA提取的基本原理和步骤 一般不同生物的基因组DNA 的提取方法不同,但主要有以下几个步骤: 破碎细胞 ,在 EDTA存在的情况下，用蛋白酶 K消化细胞或组织；用去垢剂如SDS溶解细胞膜并使蛋白质变性；再用各种有机溶剂如酚、氯仿等纯化DNA；加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,最后用TE 溶解DNA 备用。 DNA提取样本的制备与保存 因很多标本取材过后不能即时进行实验，因此，对标本进行固定显得至关重要，通常固定时间短的材料优于固定时间长的材料、同时期的固定材料冷藏的优于常温保存的[3]，其主要原因就是发生DNA 的降解。王义权等[4]认为, 以含50mmol/L EDTA 的75% 酒精作为固定样品保存剂要好于单纯的75% 酒精保存剂。 DNA提取前，一般需要对提取样本进行处理。若进行昆虫基因组DNA提取，需除去昆虫内脏或对昆虫进行饥饿24h处理,防止消