四平市儿科抗生素应用调查及葡萄球菌耐药性探索.docVIP

　　四平市儿科抗生素应用调查及葡萄球菌耐药性探索 --第一篇 2002－2005年四平市妇婴医院儿科呼吸道感染抗生素应用状况调查及分析 在我国，小儿呼吸道感染是儿科常见病和多发病，且抗生素的使用率极高，为明确四平地区儿科呼吸道感染疾病抗生素的应用现状及存在的问题,对2002年1月至2005年12月四平地区呼吸科住院儿童抗生素应用情况作回顾性调查分析。 一、资料与方法 1．资料分别随机抽取2002、2003、2004、2005年呼吸科住院儿童病例各300份。 2．方法 统计抗生素应用种类、应用频率、用药总量、实际用药天数、约定日剂量（DDD）、药物利用指数（DUI）、平均住院天数、抗生素的联合应用情况、细菌检测及药敏试验结果。约定日剂量（define daily dose，DDD）是-H琼脂等均购自杭州天和生物制品公司。 2.生化试剂：甘露醇发酵管购自杭州天和生物制品公司，兔血浆由本室制备。 3.主要实验仪器： SW-CJ-IF净化工作台 苏州集团苏州安泰空气技术有限公司 显微镜 Nikon ALPHAPHOT-2 YS2 中国 ES-60J电子分析天平 沈阳龙腾电子称量仪器有限公司 电热恒温培养箱 HG303-5 南京实验仪器厂 4.药敏纸片：青霉素 G、苯唑西林、氨苄西林/舒巴坦钠、头孢唑林、头孢呋辛、头孢哌酮、克林霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素、环丙沙星、四环素、新诺明，购自杭州天和生物制品公司。 5.质控菌：金黄色葡萄球菌ATCC25923 6.标本采集 （1）咽拭子：消毒棉签适度用力擦拭咽后壁和扁桃体部位，然后迅速放入内装3－5毫升无菌运送液的试管中（运送液为无菌的普通营养肉汤），在靠近顶端处折断棉签杆，塞紧瓶塞。 （2）菌株分离及鉴定 将所取标本划线接种于普通营养琼脂平板上，37℃培养 18－24 小时 --，挑取单个可疑菌落革兰氏染色，然后接种于甘露醇发酵管，最后结合血浆凝固酶试验将其鉴定至凝固酶阴性及阳性葡萄球菌。 （3）药敏试验：具体方法及结果判定严格参照美国临床实验标准委员会（NCCLS）1999年制定的《药片法抗菌药物敏感试验操作方法》。方法：用接种环挑取4－5个菌落接种于肉汤培养基中，置37℃培养4－6小时，然后用生理盐水稀释培养液，使其浊度至0.5号麦氏比浊管，充分混匀后用无菌棉签蘸取上述肉汤培养基，在管壁上挤压，去除多余的液体，均匀涂于 M-H 琼脂平板表面，在室温下干燥 5 分钟，用无菌镊子以无菌操作取出含药纸片贴在涂有细菌的平板上，轻轻按压，以保证纸片与培养基牢固接触，将平皿置37℃恒温箱培养16－18小时。结果判定：观察药敏纸片周围有无抑菌环，量取其直径（包括纸片直径）大小，用毫米数记录，按抑菌环直径的大小报告敏感、中度敏感和耐药。 二、结果与分析 1.未应用抗生素组250例检出葡萄球菌49株，检出率19.6％，金黄色葡萄球菌17株（17/49，34.69％），其中MRSA16株（16/49，32.65％）；凝固酶阴性葡萄球菌 32 株（32/49，65.31％），均为MRS（32/49，65.31％）。应用抗生素组 390 例检出葡萄球菌 83株，检出率 21.28％，金黄色葡萄球菌 7 株（7/83，8.43％），均为MRSA（7/83，8.43％）；凝固酶阴性葡萄球菌 76株（76/83，91.57％），其中 MRS70 株（70/83，84.34％）。经统计学处理，两组菌株葡萄球菌、MRSA与MRS的分离率无显著差异（P＞0.05）。 2.两组菌株药敏试验结果见表 6、7； 对 13 种抗生素的耐药率、中介率、敏感率分布见图6、7；耐药分布趋势见图8。 3.两组菌株对 13 种抗生素的耐药率经统计学处理除苯唑西林（P＜0.01）外均无显著差异（P＞0.05）。 第三篇Sul1及aph(3)-III基因的检测┅┅30 一、材料与方法┅┅┅30 二、结果┅┅┅┅ 30 三、讨论┅┅┅┅┅ 33 结 论 ┅┅┅┅ 35 第三篇 Sul1 及 aph(3)-III 基因的检测 一、材料与方法 1. 上述实验检出的耐复方新诺明葡萄球菌 104 株，耐庆大霉素葡萄球菌44株。 2.引物 由上海生物工程公司合成2对引物，参见Sara等人报道设计的扩增Sul1基因的引物，序列为P1：5－CTTCGATGAGAGCCGCGCGC-3、P2：5－GCAAGGCGGAAACCCGCGCC-3,扩增的片段为436bp[44]；参见糜祖煌等人报道设计的扩增aph(3)-III基因的引物，序列为P1：5－GCCGATGTGGATTGCGAAAA-3、P2：5－GCTTGATCCCCAGTAAGTCA -3，扩增的片断292bp