利用三引物PCR与同尾酶连接的策略实现多基因片段的重组.pdfVIP

第 2 1卷 第 3期 河 　北 　省 　科 　学 　 院　学 　报 Vo l. 2 1 No. 3 2004 年 9月 Jou rnal of the H ebei A cadem y of Sciences Sep 2004 文章编号 : 100 1 - 9383 (2004) 03 - 0057 - 05 利用三引物 PCR 和同尾酶连接的策略 实现多基因片段的重组① 1 1 1 1, 2 马艺沔 ,毛国红 ,汤文强 ,宋水山 ( 1. 河北师范大学生命科学学院分子细胞研究室 , 河北 石家庄 , 0500 16; 2. 河北省科学院生物研究所 ,河北 石家庄 , 050051) 摘 要 : 在构建质外体 CaM 结合小肽中间载体的过程中 ,采用了三引物 PCR 和同尾酶连接法进 行 DNA 重组 ,构建了 SLR 1B P s信号肽 CaN Cm yc 的融合基因的一连体和 CaN 二连体 。结果表 明 ,三引物 PCR 方法对多个小基因片段的重组操作方便快速 , 比酶切 、连接方法更具优越性 。 而同尾酶连接方法是连接多拷贝基因的有效方法 。 关键词 : 质外体 CaM ; 三引物 PCR 法 ; 同尾酶连接 ; DNA 重组 中图分类号 : Q 783. 1　　　　文献标识码 : A M ultigene fragm en ts recom b ina tion by TPPCR and isocaudam er liga tion 1 1 1 1, 2 M A Yim ian ,M AO Guo ho n g , TAN G W e n q ian g , SON G Shu ish an ( 1. M olecu la r and Cell Institu te of H ebei N orm a l Un iversity, S h ij iazhuang H ebei 050016, Ch ina; 2. Institu te of B iology, H ebei A cadm y of S ciences, S h ij iazhuang H ebei 050051, Ch ina) A b stract: In the p roce ss of con structing an in term ediate vector, the TriPrim erPCR m ethod wa s u sed in the con struction of a one CaN vector and the isocaudam er enzym e ligation m ethod wa s u sed in con structing a two CaN vector. The re su lts showed PCR ligation wa s sup erior to en zym e dige stion and ligation , and isocaudam er enzym e ligation wa s a p ractical way for the liga tion of m u lticop y foreign gene s. Keywords: Apop la st calmodu lin; TriPrim erPCR ; Isocaudam er enzym e ligation; DNA re