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杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构及功能研究
目 录
摘 要……………………………………………………………………………………………I
ABSTRACT………………………………………………………………………………………………………………….III
符号说明…………………………………………………………………………………………V
第一章文献综述……………………………………………………………………………….1
1.1杆状病毒的分类…………………………………………………………………………1
1.2杆状病毒的生活史………………………………………………………………………2
1.3杆状病毒感染的时相性…………………………………………………………………4
1.4杆状病毒基因组…………………………………………………………………………4
1.4.1杆状病毒的结构蛋白基因……………………………………………………….5
1.4.2杆状病毒的非结构蛋白基因…………………………………………………….6
1.5杆状病毒表达载体系统…………………………………………………………………7
1.5.1杆状病毒表达系统的优点……………………………………………………….7
1.5.2杆状病毒表达系统的种类……………………………………………………….8
1.6杆状病毒应用……………………………………………………………………………9
1.6.1杆状病毒表达载体系统的应用………………………………………………….9
1.6.2杆状病毒运用于基因治疗……………………………………………………….9
0
1.6.3杆状病毒应用于表面展示系统…………………………………………………1
1.6.4杆状病毒生物杀虫剂的应用……………………………………………………11
1.8实验的目的、意义及立项依据……………………………………………………….12
第二章pk-1基因功能域的鉴定与分析……………………………………………………….15
2.1实验材料……………………………………………………………………………….15
2.1.1菌株和质粒………………………………………………………………………15
5
2.1.2工具酶及相关试剂………………………………………………………………1
2.1.3培养基及细胞系…………………………………………………………………16
2.1.4相关试卉4的西己制………………………………………………………………………………………16
7
2.1.5引物………………………………………………………………………………………………………..1
2.2实验方法……………………………………………………………………………….17
2.2.1 PCR反应体系和程序…………………………………………………………17
2.2.3 DNA酶连反应…………………………………………………………………19
2.2.4用Cacl2法制备感受态大肠杆菌及转化……………………………………..20
2.2.5 bac.to.bac杆状病毒表达系统…………………………………………………21
2.2.6大肠杆菌中质粒的提取……………………………………………………….22
2.2.7酶切反应……………………………………………………………………….23
2.2.8 Sf9细胞的转染感染操作……………………………………………………..23
2.2.9重组病毒的电镜切片观察…………………………………………………….24
2.2.10 TCID50测定病毒滴度………………………………………………………..24
2.3实验结果…………………………………………………………
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