杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构及功能研究.pdf

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杆状病毒AcMNPV pk-1基因的结构及功能研究

目 录 摘 要……………………………………………………………………………………………I ABSTRACT………………………………………………………………………………………………………………….III 符号说明…………………………………………………………………………………………V 第一章文献综述……………………………………………………………………………….1 1.1杆状病毒的分类…………………………………………………………………………1 1.2杆状病毒的生活史………………………………………………………………………2 1.3杆状病毒感染的时相性…………………………………………………………………4 1.4杆状病毒基因组…………………………………………………………………………4 1.4.1杆状病毒的结构蛋白基因……………………………………………………….5 1.4.2杆状病毒的非结构蛋白基因…………………………………………………….6 1.5杆状病毒表达载体系统…………………………………………………………………7 1.5.1杆状病毒表达系统的优点……………………………………………………….7 1.5.2杆状病毒表达系统的种类……………………………………………………….8 1.6杆状病毒应用……………………………………………………………………………9 1.6.1杆状病毒表达载体系统的应用………………………………………………….9 1.6.2杆状病毒运用于基因治疗……………………………………………………….9 0 1.6.3杆状病毒应用于表面展示系统…………………………………………………1 1.6.4杆状病毒生物杀虫剂的应用……………………………………………………11 1.8实验的目的、意义及立项依据……………………………………………………….12 第二章pk-1基因功能域的鉴定与分析……………………………………………………….15 2.1实验材料……………………………………………………………………………….15 2.1.1菌株和质粒………………………………………………………………………15 5 2.1.2工具酶及相关试剂………………………………………………………………1 2.1.3培养基及细胞系…………………………………………………………………16 2.1.4相关试卉4的西己制………………………………………………………………………………………16 7 2.1.5引物………………………………………………………………………………………………………..1 2.2实验方法……………………………………………………………………………….17 2.2.1 PCR反应体系和程序…………………………………………………………17 2.2.3 DNA酶连反应…………………………………………………………………19 2.2.4用Cacl2法制备感受态大肠杆菌及转化……………………………………..20 2.2.5 bac.to.bac杆状病毒表达系统…………………………………………………21 2.2.6大肠杆菌中质粒的提取……………………………………………………….22 2.2.7酶切反应……………………………………………………………………….23 2.2.8 Sf9细胞的转染感染操作……………………………………………………..23 2.2.9重组病毒的电镜切片观察…………………………………………………….24 2.2.10 TCID50测定病毒滴度………………………………………………………..24 2.3实验结果…………………………………………………………

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