杨属植物的ISSR与AFLP指纹分析和应用研究.pdf

分类号： 密级： 分析及应用研究 本论文受国家“973”重点基础研究项目( ——“树木育种的分子基础研究资助 培养院系： 生命科学学院分子与细胞遗传学系 一级学科： 生物学 二级学科： 遗传学 论文作者： 高建明 指导教师： 宋文芹教授 南开大学研究生院 2006年4月25日 摘要 摘要 对品种的准确鉴定和遗传多样性及遗传相关性的了解不仅是杨树遗传研究 和育种工作的基础，而且对杨属植物的品种管理和生』“。栽培也具有}分重要的 意义，而与发达国家相比，目前我国杨属植物育种水平较低、科研经费较少， 因此迫切需要研究人员开发出具有低成本、町快速处理大批材料、准确可靠等 特点的可对杨属植物进行品种鉴定和遗传多样性与遗传相关性分析的方法。 x 』船ir05)的47个我国优良品种(无性系)进行了鉴定，遗传多样性及遗传相关 性的研究，探讨了多态性DNA带的数目及组合埘杨属植物品种鉴定与遗传相关 分析结果的影响，进而通过比较IssR与AFLP的优缺点分析了两种分子标记技 术作为高通量的杨属植物品种鉴定和遗传相似性估计方法以建立我国杨属植物 品种分子身份证数据库的潜力。 结果显示：有3条IssR引物和9对AFLP引物可在杨属植物品种中产生清 晰可辨的指纹图谱；参试品利·的IssR与AFLP多态性带百分比分别为8377％和 82．62％，其中，白杨组、黑杨组、青杨组和青杨组x黑杨组品种的多态性带 51％、62．07％、60．61％和52 百分比分别为35 17％，而黑杨组中欧美杨品种和美 洲黑杨品种的AFLP多态性带百分比分别为66．02％和55．52％；白杨组、黑杨组、 青杨组和青杨组×黑杨组绍内品种间的】ssR与AFLP平均相似系数分别为 781、0 0819，0 731和0 689，黑杨组中欧美杨品种问和美洲黑杨品种问的平均 相似系数分别为O640和0743。基于两种分子标记技术的聚类分析产生的结果 较为相似，结合主坐标分析可将实验品种分为四个大类，它们分别代表了白杨 组的品种、胡杨组的品种、具有异源起源的黑杨组，青杨组／青杨组×黑杨组的品 种和我围原生的黑杨组／青杨组／青杨组×黑杨组的品种，而按照AFLP数据，可 将黑杨组品种分为欧美杨品种和美洲黑杨品种这两个亚类。 就多态性带的数目及组合对杨属品种鉴定与遗传相关分析的影响进行了分 析，结果发现：相似性分析结果的准确性随着多态性带数目的增加而增加，但 是增加的速度却随着多态性带数目的增加而降低，而且引物刺越少，由引物对 数日相同的不同引物对组合所得结果问的差异就越大；如果从实验结果的可靠 性与成本两个方面综合考虑，那么可用于黑杨组品利·鉴定与遗传相似-性分析的 M—C1vI’，E—ACT×M—CAT。 本项研究首次利用分子标记技术对我国杨属植物优良品种进行了鉴定、遗 传多样性及遗传相关性的研究。结果发现：所有的实验品种部可以用其IssR或 AFLP指纹图谱加以明确鉴定；我国杨属植物品种遗传多样性的总体水平较高， 但美洲黑杨品种具有较低的遗传多样性，其中一些品种的混合种植存在着与推 广单一无性系类似的危险，此外白杨组的品种也可能具有较低的遗传多样性； 青杨组和黑杨组品种问的遗传相似性较高，而美洲黑杨种内品种『日J具有紧密的 遗传相关性，这与我国绝大多数黑杨品种是由I．69、I．63以及山海关杨等少数几 个品种为亲本选育而成的实际情况相符台。 本研究独创性地提出了在对植物进行品种鉴定和遗传相似性估计时筛选最 优引物(对)组合以降低试验成本的方法。研究发现：明确鉴定22个美洲黑杨 和欧美杨品种至少需要使用2对AFLP引物；进行相似性分析时，使用大约220 条多态性带或6对AFLP引物，品种问相似系数的变异系数为5％，若使用大约 160条多态性带或4对AFLP引物，则可得到初步的实验结