杉木microRNA399a的功能探究.pdf

FUNCTIONALANAI，YSIS0Fmicro尺人搿399a A DissertationSubmittedto theGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe of Degree MasterofScience By Zhu A0／ng Supervisor：Prof．WangLinsong Prof．QiuZongbo May2015 摘要 存在于原核、病毒和真核生物中。miRNA通过对靶基因mRNA的互补配对介导靶 mRNA的降解或抑制蛋白水平的翻译，从而对靶基因的表达进行转录后的负调控。近 些年的研究表明，miRNA对植物的生长发育和某些器官形成的各个阶段都具有重要调 控作用。目前研究发现miR399存在于拟南芥、水稻和小麦等多种植物中，是植物中一 知之甚少。本论文运用了生物信息学、分子细胞学、高通量测序和遗传学等方法，以模 j Cln．miR399a前体的表达载体，获得了 式植物拟南芥为研究材料，构建35S 式和调控机制的研究。通过分子细胞生物学和转基因株系表型的观察得到以下结果： (1)通过高通量测序和生物信息学的方法，从杉木基因组DNA中鉴定并克隆 杉木基因组数据库中预测和分析其潜在的靶基因，初步确定靶基因为Unigene56556， 并且其成熟序列和拟南芥miR399c的成熟序列完全相同； 叶片的表达水平高于根部，而在根和叶中，果颊期Cln．miR399a的表达量较高，初步明 确Cln．miR399a在拟南芥中存在时空表达特异性； (3)实时荧光定量PCR(Real．time 一定的切割作用； 植株Cln．miR399a呈现出主根变长、幼叶结构改变、株高增加、叶片总数减少、开花提 前以及角果个数增加等表型性状，初步确定过表达对植物生长发育具有一定的调控作 T 用。 关键词：杉木，MicroRNA，拟南芥，靶基因 II ABSTRACT 20-24nt small RNAwhich existin MicroRNAs(miRNAs)areendogenousnon-coding widely viiuse8， mRNAsorinhibitstheirtranslation and by prokaryotesenkaryotes．111e)rdegradatestarget directlybinding a8 onthe tothe of mRNAsSO to target negativelyregulategeneexpression complm