两种荧光标记物对中枢神经系统内源性神经干细胞的标记效果比较 .pdf

Med J Chin PLA, Vol. 37, No. 9, September 1, 2012 　673 ·基础论著· 两种荧光标记物对中枢神经系统内源性神经干细胞的标记 效果比较 谭波涛，虞璟，刘媛，伍亚民，龙在云，贾功伟，虞乐华 [摘要]　目的　观察DIL和DAPI两种不同的标记物对中枢神经系统内源性神经干细胞的标记效果。方法　清洁级 健康成年SD大鼠36只，随机分为实验组(DIL组，DAPI组)和对照组(DMSO组，PBS组) 。使用立体定位仪，向实验组 大鼠侧脑室注入0.2% DIL或10 μg/ml DAPI 各10 μl ，对照组大鼠侧脑室相应注入DMSO或PBS各10 μl 。注射后2h和24h 对动物进行神经功能损伤评分(NSS)。采用激光共聚焦显微镜观察注射后1、3 、7d脑室及脊髓颈、胸、腰段室管膜细 胞的荧光标记情况，对目标区域荧光强度进行半定量分析，并对不同组别和时间点的脑室及脊髓标本测定结果进行比 较。结果　注射DIL及DAPI后2h ，大鼠NSS评分很低，与相应对照组相比差异无统计学意义(P ＞0.05) ，24h后基本恢 复正常。DIL注射后1d ，侧脑室及各节段的脊髓室管膜细胞胞质均显示红色荧光，一直持续到注射后7d 。DAPI 注射后 1d ，侧脑室内标记的细胞核形态清晰，呈蓝色，脑室脉络丛大量细胞亦可见蓝色荧光标记，但脊髓各节段室管膜区的 细胞均未见蓝色荧光，注射后3 、7d 的情况与1d类似。两种试剂标记后，目标区域内各时间点的荧光强度差异无统计 学意义(P 0.05)。结论　DIL可对内源性神经干细胞的细胞质进行标记，适合作为侧脑室和脊髓室管膜内源性神经干细 胞的标记物。DAPI可标记细胞核，适合用于侧脑室内源性神经干细胞的标记。脑室注射荧光染料对动物影响小，是一 项相对安全的操作。 [关键词]　干细胞；中枢神经系统；荧光抗体技术；DIL ；DAPI [中图分类号]　R329.4 [文献标志码]　A [文章编号]　0577-7402(2012)09-0673-06 Comparison of the marker effects of two different fluorescent dyes in labeling endogenous neural stem cells in the central nervous system 1 1 2 2 2 1 1* TAN Bo-tao , YU Ji ng , LIU Yuan , WU Ya-min , LONG Zai-yun , J IA Gong-wei , YU Le-hua 1Department of R ehabilitation, Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China 2 Third Department of Institute of Field Surgery, Daping Hospital, Third M ilitary Medical University, Chongqing 400042, China * Corresponding author, E-mail: y ulehuadoc@ [Abstract] 　Objective　To observe the marker effects of two different fluorescent dyes, DIL and DAPI, in labeling endogenous neural stem cells (ENSCs) in rat central nervous system. Methods　Thirty-six Sprague-Dawley rats were randomized into staining groups, comprising DIL grou