实验1-大肠杆菌培养与分离.pptVIP

实验1 大肠杆菌的培养与分离;细菌的革兰氏染色 (P23);细菌的外形与大小;二、培养基 ;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。;液体培养基：;☆ 无菌技术;（１）消毒定义：;高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌;1、灼烧灭菌;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;实验用具;抱施靴甫邮炉茵酿腻浇媚吊哺眠赊究绢殴滨凳脸藻蝇绽泞眯隔线臻柏旁练实验1-大肠杆菌培养与分离实验1-大肠杆菌培养与分离;二、大肠杆菌的培养和分离实验操作; （二）倒平板;倒平板技术;注意事项： 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板 2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒 3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作. 4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌 5.平板冷凝后，要将平板倒置, 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；若培养皿中已形成菌落，很难再形成单菌落，达不到分离目的。; 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;2.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？; （三）大肠杆菌的扩大培养;（四）大肠杆菌的分离;一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。;（四）大肠杆菌的划线分离;钞膝几羡酋一虑谤话第娥赐斌交釉郁吾社锦被蛤跃毙敢唯慌李卜笨吧砸庭实验1-大肠杆菌培养与分离实验1-大肠杆菌培养与分离;问题讨论; 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;（五）大肠杆菌分离后保存;1.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;2.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;3.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?; （一）培养基的制作是否合格 将未接种（空白）的培养基放在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 ;例1．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;Ⅱ：回答有关“大肠杆菌的培养和分离”的问题： （1）大肠杆菌的扩大培养需要用LB培养基50ml，其配方为：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、氯化钠0.5g、水50ml。培养基中加入一定量的氯化钠，目的是 。 （2）在制备培养基时，有时还需要调节酸碱度，这一步骤应该在灭菌 。（填“前”或“后”） （3）用划线法在LB固体培养基上分离大肠杆菌，当接种完成后，盖好培养皿盖，将培养皿 ，放在37℃恒温箱中12~14h，当看到划线末端出现 时，表明细菌已被分离。 （4）如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染？ ;例、（1）在细菌的培养分离过程中涉及多个温度指标，请把下列操作过程和它对应的温度指标用选在每个灭菌过程后面。 A.121℃ B.50~60℃ C.35~37℃ D.25~28℃ E.140℃ 用烘干机干热灭菌2~3h 。 恒温培养细菌18~24h 。 恒温培养真菌18~24h 。 溶解或灭菌后的培养基倒平板时的温度 。 高压蒸汽灭菌 。 ;（2）在细菌培养的灭菌环节中，对待不同的设备装置用不同的灭菌方法。请在各对象后面选上