硼酸盐对马铃薯干腐病菌的抑菌特性研究.doc

硼酸盐对马铃薯干腐病菌的抑菌特性研究 周矿归 摘要：F. sulphureum 菌丝生长和孢子萌发能被两种硼酸盐抑制，其抑制作用随着浓度的增加而增加，1.0%四硼酸钾最好，其菌落直径仅为对照的5.8%。可见硼酸盐可通过抑制病原物的生长而有效地控制马铃薯干腐病。 关键词：马铃薯；硫色镰刀菌；硼酸钠；四硼酸钾；抑菌特性 前言 马铃薯是北方的重要经济作物，甘肃省作为我国马铃薯生产的最佳适宜区之一，目前全省马铃薯种植面积扩大到746万亩，居内蒙古自治区之后，列全国第二；总产量达到755万吨，居全国第一。马铃薯的种植、发展越来越引起人们的重视。但是近年来，马铃薯贮藏期腐烂问题也日渐突出。据调查造成烂窖的主要原因是块茎携带病菌。虽然马铃薯块茎病害有15多种，但是其中Fusarium solani和晚疫病复合侵染或Fusarium solani诱发侵染是导致烂窖的主体，[2]。最终导致马铃薯减产和商品性降低，对生产者造成极大的损失。 干腐病又名“干腐烂”，染病块茎长白色至灰色绒毛物，内部薯肉则呈灰褐色至深褐色病变，有的出现空心，空腔内充满菌丝体，严重时整个块茎僵缩或呈干腐状，不能食用。目前采后防治主要有物理方法，如收获或贮藏期尽量避免一切机械损伤，精选种薯，剔除病薯、虫薯、伤薯，贮藏期间勤检查，发现病薯应及时剔除，减少传播，但物理方法操作较为复杂且费用较高，不易推广干腐病是由镰刀菌Fusarium spp.）[3]所致病的。如世高﹑敌力脱﹑适乐AF-137﹑奥美灵3号1 材料与方法 1.1 材料 供试材料：青薯168，来自青海省农业科学院 。 供试菌种：硫色镰刀菌（Fusarium sulphureum Schlechlendahl），甘肃省农业科学院植物保护所提供。 硼酸钠（Na2BO3）天津化学试剂厂，分析纯。 四硼酸钾（K2BO3．4H2O）天津化学试剂厂，分析纯。 1.2 方法 1.2.1培养基制作 参照方中达 [9]法进行。制作马铃薯水琼脂培养基(PDA)，培养基成分：马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂17～20g，蒸馏水1000mL。将马铃薯切碎，加水煮沸30min后过滤。同时将糖和琼脂分别溶解后与马铃薯过滤液混合，并定容至1000mL。分装在三角瓶中进行高压灭菌。灭菌后制备平板PDA。 1.2.2病原菌的分离、纯化和鉴定 参照方中达[9]法。采集典型马铃薯干腐病块茎，用75%酒精表面消毒，无菌水冲洗后，切取病健交界处组织，在无菌操作条件下移置到PDA平板上，于28℃保温培养，待长出分生孢子后进行单孢分离，纯化后在PDA培养基上保存待用。 1.2.3 孢子悬浮液的配制 参照Bi et al.方法。Tween80的无菌水约10ml收集病原菌孢子，用四层纱布过滤并转入已灭菌的三角瓶中，振荡器上充分振荡，待孢子完全被打散均匀后，获得纯孢子悬浮液，经显微血球计数板计数确定孢子浓度后，并计算稀释至所需浓度1×106个/ml。 1.2.4 硼酸盐处理对硫色镰刀菌菌丝生长的影响 选择的菌种为硫色镰刀菌，在灭菌后的PDA培养基分别加入三种浓度梯度的四硼酸钾和硼酸钠，使培养基中的硼酸离子浓度达到（0.25%、0.5%、1% ），冷却后制成平板。对照培养基不加四硼酸钾和硼酸钠溶液，调整pH值为6.7。将7mm的硫色镰刀菌菌饼置于培养基上，接菌后的培养皿25℃倒置培养，分别于第5d测量菌落直径。 1.2.5硼酸盐处理对硫色镰刀菌孢子萌发的影响 在配制好的孢子悬浮液调到一定的浓度后，先在水琼脂培养基上接上不同浓度的硼酸盐，再用移液器将配制好的孢子悬浮液移到培养基上，6h后在显微镜下测定各个培养基上的孢子数，并记录。 1.2.6硼酸盐处理损伤接种硫色镰刀菌对马铃薯的影响 参照 Bi et al（2005）[11]方法，选择外观整齐，无病虫危害的马铃薯块茎，75%酒精表面消毒，再用灭菌打孔器（直径3mm）在块茎上均匀刺3mm深的伤口个，F. sulphureum后用不同浓度（0.25%，0.5%，1.0%采用Microsoft Excel计算标准误差（±SE）并作图。 2 2.1硼酸盐对硫色镰刀菌菌丝生长的影响 2.1.1硼酸钠处理对硫色镰刀菌菌丝生长的影响 图 1 硼酸钠处理对F. sulphureum菌丝生长的影响 由图1可知，不同浓度的硼酸钠溶液对硫色镰刀菌菌丝生长表现出不同的抑制效果，各个浓度都具有显著性差异，随着浓度的不断增加抑制效果也越明显，差异性也越显著，其中以1.0%的硼酸钠效果最为明显，其菌落直径仅为对照的48%。 2.1.2四硼酸钾处理对镰刀菌菌丝生长的影响 图 2 四硼酸钾处理对F. sulphureum菌丝生长的影响 各浓度四硼酸钾处理均能显著的抑制F. sulphureum菌丝的生长，随着处理浓度的不断增加抑制效果也越明