Q20L及G247D定点突变对葡萄糖异构酶酶活和最适pH的改善.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’()*!+(*# 年 月 $%%% !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( ,-) $%%% - 12 . !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 及 定点突变对葡萄糖异构酶酶活和最适 的改善 #$ %’( * ! ) ， ， ! ! ! !$ !$ ! 朱国萍 罗 丹 蔡云飞 朱学勇 滕脉坤 王玉珍 ! （中国科学技术大学生命科学学院分子生物和细胞生物学系 合肥 ） $2%%$ $ （中国科学院中国科学技术大学结构生物学重点实验室 合肥 ） $2%%$ 摘 要 用双引物法对 基因进行体外定点突变，构建了突变体 和 。含突变基因的重组表达质粒 DE F$%G D$#H 3JH0DEF$%G及 3JH0DED$#H在 菌株中表达。纯化的突变酶与野生型酶相比：（） 的最 I I 340(,#J21 ! DEF$%G 适反应温度下降 ，热稳定性为野生型酶的 ，对底物的亲和性增强；（） 的酶活提高约 ，最适 5K 1L $ DED$#H 22L 下降 个单位，但热稳定性降低。初步分析认为， 位于 螺旋之间，其亲水侧链被 的疏水侧 M %N D)$% %#! G4- I 链取代后，分子表面增强的疏水作用，反而不利于蛋白质的稳定，使 的热稳定性降低。 是酶活性中 DEF$%G D)$# . 心 折叠（ ）的最后一个残基。引入电负性极强的 后，可能改变分子的静电场分布，影响了活性部位 0 $#$#$#77 O@ $ I 的电荷传递过程，使 酶活提高。引入的电荷，可能改变活性中心可解离基团的 ，使其最适 下降。