重组人BMP-2缓释作用于基质血管成分细胞.PDFVIP

• 862 • Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, Jul. 2017, Vol. 31, No.7   ·干细胞与组织工程· 重组人 BMP-2 缓释作用于基质血管成分细胞 促进大鼠脊柱融合的实验研究 1 2 2 1 1 1 袁维 ，郑军，钱晋宇，周小小，王明辉，王秀会 1. 上海健康医学院附属周浦医院骨科（上海   201318 ） 2. 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院骨伤科（上海   200437 ） 【摘要】   目的    将重组人 BMP-2 （recombinant human BMP-2 ，rhBMP-2 ）缓释作用于新鲜分离的大鼠基质血 管成分细胞（stromal vascular fraction cells ，SVFs ），移植到大鼠腰椎横突后外侧，观察其促进脊柱融合的效果。方 法    取健康 4 月龄 SD 大鼠双侧腹股沟区皮下脂肪，采用 Ⅰ 型胶原酶消化法提取 SVFs 。通过仿生磷灰石涂层方 法，将 rhBMP-2 与β-磷酸三钙（β-tricalcium phosphate，β-TCP）通过共价键结合制成缓释载体，通过 BCA 法测定 其缓释效应。将 32 只大鼠随机分成 4 组，每组 8 只。采用 L 、L 横突去皮质化方法制备大鼠腰椎后外侧融合模 4 5 型，分别于 A、B、C、D 组植入 PBS+脱钙骨基质（decalcified bone matrix ，DBX ）、rhBMP-2/β-TCP 缓释载体+DBX、 SVFs+DBX 和 SVFs+rhBMP-2/β-TCP 缓释载体+DBX。术后 8 周获取腰椎融合标本，进行手法判断和 X 线片观察 评价脊柱融合情况，以及 micro-CT 评价脊柱融合情况，并分析骨密度（bone mineral density ，BMD ）及骨体积分 数；行 HE 染色、Masson 三色组织学染色，以及免疫组织化学染色检测骨钙蛋白（osteocalcin ，OCN）。结果    2 周 时 rhBMP-2/β-TCP 缓释载体的 rhBMP-2 体外累计释放量为 40% 左右，起到缓慢释放效果；而未经仿生磷灰石涂 层的对照组 2 周时几乎停止释放 rhBMP-2 。手法判断、X 线片和 micro-CT 评估一致，显示 D 组成骨能力最强，达 100% 融合（8/8 ），之后依次为 B 组（75%、6/8 ）、C 组（37.5%、3/8 ）、A 组（12.5%、1/8）。Micro-CT 分析示，D 组 BMD 和骨体积分数均显著高于其余 3 组，B 组显著高于 A、C 组，差异均有统计学意义（P0.05）。HE、Masson 三 色染色和 OCN 免疫组织化学染色示，D 组有大量软骨细胞连接，伴有骨基质沉积、有活跃的成骨过程，类似长骨 的矿化过程；B 组的骨形成相对 D 组较弱；A、C 组缺乏有效的新骨形成。结论    新鲜分离的 SVFs 在 rhBMP-2 缓释作用下，显示出良好的骨生成能力，可有效促进脊柱融合，为临床应用提供理论基础。 【关键词】  基质血管成分细胞；重组人BMP-2 ；骨形成；脊柱融合；大鼠 Sustained release of recombinant human bone morphogenetic protein-2 combined with stromal vascular fraction cells in promoting posterolateral spinal fusion in rat model 1 2 2 1 1 1 YUAN Wei , ZHENG Jun , QIAN Jinyu , ZHOU Xiaoxiao , WANG Minghui , WANG Xiuhui 1. Department of Orthope