当归红芪超滤物对X线辐射肝癌SMMC-7721细胞及p21蛋白表达影响.pdf

当归红芪超滤物对X 线辐射肝癌 SMMC-7721 细胞及 p21 蛋白表达的影响 中 文 摘 要 目的：通过医用直线加速器X 射线一次性照射体外培养的人肝癌 SMMC-7721 细胞， 构建辐射模型。探讨当归红芪超滤物对于直线加速器（X 射线）辐射前后人肝癌 SMMC-7721 细胞及其 p21 蛋白表达的影响，为应用当归红芪超滤物辅助临床放疗增敏 减毒治疗肿瘤提供实验依据。 5 方法：取密度为1×10 个/mL 肝癌 SMMC-7721 细胞用于实验。实验分为 8 组，其 中 1 个对照组（C ）即正常对照组，1 个纯辐射组(R)给以源皮距 100cm 4Gy 的X 射线， 另设 3 个纯药物组(D)，3 个辐射加药组(R+D) 。分别设H 、M 、L 三个药物浓度梯度为： 8mg/ml 、6mg/ml、4mg/ml 。光学显微镜下观察细胞外部形态；在电镜下观察细胞超微 结构；MTT 法检测细胞生长抑制率；用流式细胞仪检测细胞周期变化；并采用 western-blot 法检测细胞中 p21 蛋白表达情况。 结果：（1）MTT 法检测结果：经当归红芪超滤物作用后的肝癌细胞其 OD 值降低 并呈药物浓度依赖关系（p 0.01 ）。提示其对于人肝癌 SMMC-7721 细胞具有抑制增殖作 用。辐射加药组细胞的 OD 值较单纯辐射组明显降低（p 0.01 ），表明辐射联合药物能进 一步抑制细胞的活性，起到辐射增敏作用。(2)流式结果显示：4Gy X 射线辐射后 24h 可 使肝癌细胞 G /G 期细胞数量明显增多，由 44.7 ％升至 71.6 （p 0.01 ），药物也可以使 0 1 G /G 期细胞比例有所升高（p 0.01 ），辐射加药组细胞 G /G 期阻滞最为明显并呈药物 0 1 0 1 浓度梯度关系，辐射加高剂量药物阻滞可高达 80.8 ％（p 0.01 ）。（2 ）光镜下形态学观 察：C 组细胞形态呈花瓣状，细胞间排列紧密，细胞大小不一，异形性明显，细胞膜完 整光滑；R 组外形并无明显改变，但密度明显下降；R+LD 组细胞排列松散，细胞间隙 增大，密度进一步下降；R +MD 组细胞形态不规则，排列更为松散，细胞体积明显缩 小；R +HD 组细胞大多已成圆形，表面散在空泡，仅见模糊的细胞大体轮廓，核染色质 边集。（3 ）电镜下形态学观察：C 组细胞形态规则，核染色质分布均匀，核仁清晰，细 胞膜完整；R 组细胞核染色质密度增高，凝聚在核膜周边，细胞膜皱缩粗糙不完整；HD 组细胞核染色质边集、浓缩、线粒体肿胀、内质网扩张，出现空泡变性；R+HD 组细胞 线粒体进一步肿胀，空泡变性加重，有细胞自噬现象发生，细胞形态改变明显。（4 ）p21 蛋白表达：western-blot 结果显示辐射加高浓度药物组细胞 p21 蛋白表达较纯辐射组细胞 明显增强。 1 当归红芪超滤物对X 线辐射肝癌 SMMC-7721 细胞及 p21 蛋白表达的影响 结论：当归红芪超滤物（10 万分子量）对人肝癌 SMMC-7721 细胞具有抑制生长作 用，对辐照后人肝癌 SMMC-7721 细胞有一定增敏作用。 关键词：当归红芪超滤物； X 射线辐射；人肝癌 SMMC-7721 细胞；p21 蛋白 2 当归红芪超滤物对X 线辐射肝癌 SMMC-7721 细胞及 p21 蛋白表达的影响 Abstract Objective: Through medical accelerator X-ray radiated human hepatoma SMMC-7721 cells, constructing model. To investigate the effect of ultra-filtration