应用发光细菌cinetobacter sp. tox2及acinetobacter sp. reca快速检测海水生物毒性的研究.pdfVIP

摘要 应用发光细菌Acinetobacter sp. Tox2 和Acinetobacter sp. RecA 快速检测海水生物毒性的研究 摘 要 发光菌检测法（luminescent bacteria test，简称LBT ）是以天然或人工改造的 发光细菌为受试生物进行毒性检测的技术。发光细菌能够表达细菌荧光素酶，从 而产生生物发光现象。当细菌暴露于毒性环境中时，外界有毒物质会使发光细菌 的发光强度发生变化，借助于高灵敏度的生物发光检测仪器，可以定性或定量的 表征有毒物质的毒性大小。然而，现今报道的多数发光细菌多用于检测淡水的急 性毒性，而对海洋污染遗传毒性的相应检测技术或标准更是尚未起步，其次，鱼 类等普通生物检测生物毒性有耗时耗力的缺陷。本文以两株发光细菌 Acinetobacter sp. Tox2 和 Acinetobacter sp. RecA 为研究对象，以发光抑制率和发 光诱导率表示急性毒性和遗传毒性的大小，优化了生物毒性快速检测方法，并对 实际海水样品的生物毒性进行评价，在此基础上考察了这两株发光细菌可用于快 速检测海水生物毒性的可行性。 该研究首先对两种发光细菌的培养条件、检测条件进行了优化。研究表明， Tox2 菌株的次代培养时间（B 液）为 8 h， RecA 菌株的次代培养时间为 16 h。 两株细菌可以检测盐度为 30 左右的样品，在检测过程中需要保持室温 30 ℃。检 测过程中急性毒性最短可以在 30 min 内得到实验结果，而遗传毒性最短可以在 3 h 内得到实验结果。 其次利用这两株发光细菌检测了模拟污染海水中总石油烃（TPH ）、4 种重 金属离子（Hg2+ 、Zn2+ 、Cu2+ 、Cd2+ ）、4 种多环芳烃（菲、芘、荧蒽、苯并[a] 芘）的急性毒性和遗传毒性。研究发现，菌株 Tox2 和 RecA 对总石油烃的检出 限达到了 0.001 mg/L ；菌株Tox2 对四种重金属离子表现出不同的敏感度，并可 以计算样品浓度与发光抑制率的回归方程，四种重金属对Tox2 的EC50 分别为： HgCl 0.108 mg/L 、ZnSO 46.0 mg/L 、CuSO 0.816 mg/L 、CdCl 14.2 mg/L；菌株 2 4 4 2 Tox2 对多环芳烃中的菲和芘比较敏感，EC50 分别是 1.46 mg/L 和 0.266 mg/L 。 在现场实验中，采用发光细菌法快速评价了环渤海排污口 12 份污水样品的 I 应用发光细菌Acinetobacter sp. Tox2 和Acinetobacter sp. RecA 快速检测海水生物毒性的研究 生物毒性。12 个排污口的污水样品均表现出不同水平的急性毒性和遗传毒性， 所有排污口样品的急性毒性整体偏低，只有 BH3 站位污水的急性毒性达到了剧 毒级别，当量 HgCl2 浓度达到 0.193 mg/L，多数站位样品的当量HgCl2 浓度小于 0.02 mg/L 。遗传毒性整体偏高，多数站位的当量MMC 浓度高于 0.2 mg/L 而 BH4 站位样品的当量 MMC 浓度高达 2.41 mg/L 。生物毒性同时也呈现出一定的地理 分布特征。其中，高毒水质集中出现在山东半岛污水样品中，中毒水质集中出现 在辽东半岛地区，而低毒水质主要集中于京津冀地区。同时，针对黄岛“11.22” 溢油事故进行了海水遗传毒性的快速检测。选取溢油后 90 d 内距离溢油点 1～15 km 的 5 个站点，结合化学荧光分析，将发光细菌 RecA 应用于溢油污染海水样 品的遗传毒性评价。研究发现，溢油 1d 后距离泄漏原油入海口 1 km 以内的S1、 S2、S3 站点海水样品的石油烃含量为 0.55 mg/L～1.04 mg/L，其遗传毒性相当于 0.60 mg/L～1.78 mg/L 的丝裂霉素C （MMC ）；海水中的石油烃含量随时间逐渐 降低至 ＜0.02 mg/L，其遗传毒性也随之逐渐降低。而距离泄漏原油入海口 ＞5 km 的 S4、S5 站点海水样品的石油烃含