原液IgG残留量标准操作规程.docVIP

细胞因子原液IgG残留量检测标准操作规程 依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。 范围：适用于纯化工艺中应用单克隆抗体亲和层析技术的细胞因子原液的检定。 目的：通过酶标法测定细胞因子原液中残余鼠IgG含量。 原理：通过化学方法，将酶与抗原（抗体）结合，形成酶标记物。这种酶标记物仍保持免疫学活性和酶的活性，然后与相应的抗体（或抗原）起反应，形成酶标记的免疫复合物。在一定的底物参与下，免疫复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成另一种带色物质。在一定条件下，酶的降解底物和呈色是成正比例的。因此可用酶标检测仪进行测定。 内容： 1 材料 1．1样品：经二人复核批号无误后测定。 1．2试剂 无水碳酸钠 Na2CO3 分析纯 碳酸氢钠 NaHCO3 分析纯 磷酸氢二钠 Na2HPO4·12H2O 分析纯 氯化钠 NaCl 分析纯 磷酸二氢钠 NaH2PO4·2H2O 分析纯 牛血清白蛋白 分析纯 叠氮钠 NaN3 分析纯 柠檬酸 C6H8O7·H2O 分析纯 邻苯二胺 分析纯 双氧水 H2O2 分析纯 浓硫酸 H2SO4 分析纯 兔抗鼠IgG 军科院提供 HRP-兔抗鼠IgG 军科院提供 1．3标准品：中国药品生物制品检定所提供。 1．4注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。 1．5其它材料： 稀释板；移液吸嘴；硫酸纸；吸球、药勺、滤纸、记号笔。 1．6仪器、设备 酶标检测仪，型号DG3022 恒温培养箱（37℃） PH酸度计，PHS-3C 冰箱BCD-3C 扭力天平，TN100B型 1．7器皿 1．7．1量筒（1000ml、100ml）、玻璃瓶（500ml、250ml）、三角瓶（2000ml）、胶栓，以上均由本室洗刷处理干净。 1．7．2 96孔酶标板，进口。 1．7．3微量稀释枪，进口。 2 方法 2．1准备工作 2．1．1工作环境，控制区37℃下进行, 确定场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。 2．1．2调试仪器设备 酶标检测仪，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 PH酸度计，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 扭力天平，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 冰箱，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。 2．1．3试剂配制 2．1．3．1包被液：0.05M碳酸盐缓冲液 用扭力天平准确称取Na2CO3，0.79g；NaHCO3，1.47g，加注射用水至500ml，调至PH9.6。倒入500ml玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配置日期，放入4℃冰箱备用。 2．1．3．2洗涤液（PH7.4） 用扭力天平称取NaCl，8.0g；Na2HPO4·12H2O，2.9g；NaH2PO4·2H2O，0.296g；吐温-20 0.5ml；NaN3，0.2g，加注射用水至1000ml。存入1000ml玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配置日期，室温放置。 2．1．3．3 1%牛白蛋白 用扭力天平准确称取1克牛白蛋白，加99ml 4.1.3.4项稀释液。存放在250ml玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配置日期，4℃放置。 2．1．3．4稀释液 用扭力天平准确称取NaCl，8.0g；Na2HPO4·12H2O，2.9g；NaH2PO4·2H2O，0.296g；吐温-20，0.5ml；NaN3，0.2g；牛白蛋白，5g，加注射用水至1000ml。存放在1000ml玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配置日期，室温放置。 2．1．3．5底物缓冲液 用扭力天平准确称取Na2HPO4·12H2O，1.84g；柠檬酸，0.51g；定溶至100ml,PH5.0。存放在250ml玻璃瓶中，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配置日期，4℃冰箱放置。 2．1．3．6底物液：用扭力天平准确称取邻苯二胺，8mg；加入底物缓冲液，20ml；30% H2O2，30μl；存放