测序前核酸提取的不二选择.PDFVIP

测序前核酸提取的不二选择 ——Kurabo QuickGene 技术在NGS 中的优秀表现 摘要: 全基因组测序对DNA 质量的要求非常高，不仅要求DNA 的量要充足，DNA 的纯度要高， 而且DNA 的完整性也非常重要。如果DNA 完整性差的话，断裂的DNA 片段不仅在抽取过程 中容易降解，而且在测序后的结果分析时，也难以获得全面的信息。Kurabo 公司的QuickGene 技术可以从全血、动植物组织和细胞菌液等中得到高质量的 DNA，不仅得率高，纯度好， 而且DNA 更长，有利于测序实验得到理想的结果。 原理- Kurabo 创新的专利超薄多孔滤膜 Kurabo QuickGene 试剂盒采用独家专利的超薄多孔滤膜，超薄滤膜可在低压的条件下获 得更长的核酸，避免离心力对核酸产生剪切，还可减少抽提的时间；多孔滤膜比表面积大， 具有出色的核酸吸附和解吸附能力，避免蛋白及其他杂质的吸附，获得更多和更纯的核酸。 图1：创新的多孔滤膜扫描电镜拍摄结果 创新的亲水性多孔滤膜厚度仅80um，是玻璃纤维滤膜厚度的1/12.5，而表面积比玻璃纤维 滤膜大20 倍，无需高压即可完成样本纯化实验 专利薄膜技术带来很多优点： 1.专利薄膜表面积大，核酸吸附力强，得率高； 图2：QuickGene 方法与其他核酸提取方法得率比较 分别用QuickGene-810、硅胶膜法和磁珠法从200ul 全血样本中提取基因组DNA，平均每组 10 个样本，QuickGene 得到的DNA 量为5.8ug，硅胶膜法为4.2ug ，磁珠法为2.7ug 。 2.专利薄膜具有亲水特征，亲水性的核酸易吸附，而疏水性的蛋白质和脂类很容易被洗 脱出过滤膜，而且优化的洗脱液成分更接近纯水，得到的核酸纯度好； 图3：QuickGene 从各种样本中得到高质量的核酸 分别从菌液中提取质粒DNA，从小鼠尾巴和肝组织中提取DNA，从小鼠肝脏、脾脏和心脏组织中 提取RNA，用QuickGene 提取的核酸在保证高得率的前提下，260/280 均在1.8–2.0 之间，260/230 均在 2.0–2.2 之间。 3.专利薄膜滤膜厚度是传统硅胶膜的1/12.5，能正压法过柱，温和、剪切力小，DNA 片 段更长，完整性好； 图4 ：QuickGene 抽提的核酸更长 因为QuickGene 抽提使用的是正压方式洗 脱，得到的DNA 片段可达97kbp 。而传统 的硅胶膜法使用的是离心的方式进行洗 脱，而离心力在洗脱过程会对DNA 产生剪 切，所以得到的DNA 片段只在24.5kbp 处 97kbp 富集。 M：Midrange PFG maker 24.5kbp II;Q:QuickGene-610L;S:Spin Column 4.专利薄膜滤膜厚度超薄，不易堵柱子，能做粘稠血样如糖尿病，还能做血凝块； 图5：QuickGene 和其他滤膜法抽提糖尿病人血样比较 糖尿病人血样由于含糖量高所以非常粘稠，用滤膜法进行粘稠样本核酸的提取是一个挑战。我们分 别用QuickGene 和其他品牌的滤膜法对47 个糖尿病人血样进行核酸的抽