mhc-ⅰ荧光四聚体载体的构建及其真核表达-第三军医大学学报.docVIP

MHC-Ⅰ荧光四聚体载体的构建及其真核表达 熊锐华1，李景怡1，邹丽云2，张晋宇2，万 瑛2，张荣华1 (第三军医大学：1第一附属医院中医科，2基础医学部全军免疫学研究所 重庆，400038) 摘要 目的 构建MHC-Ⅰ荧光四聚体真核表达质粒，并表达、纯化该蛋白，以更简便地检测特异性T细胞。 方法 运用分子克隆技术，构建sKb-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒，转染293FT细胞表达，并以镍亲和层析法纯化。 结果 经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-Ⅰ荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化，并经SDS电泳证实。 结论 得到了纯化的MHC-Ⅰ荧光四聚体，并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别，为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法。 关键词 MHC-Ⅰ；四聚体；真核表达 中图法分类号： 文献标识码：A Recombinant vector construction of MHC-Ⅰ-fluorescin tetramer and eukaryotic expression XIONG Rui-hua1，LI Jing-yi1，ZOU Li-yun2，ZHANG Jing-yu2，WAN Ying2，Zhang Ronghua1 (1Traditional Chinese Medicine Department，Hospital；2Institute of Immunology，Third Military Medical University. Chongqing 400038，China)To construct an eukaryotic expression vector that expresses MHC-Ⅰ- fluorescin tetramer and to express and purify the protein in order to detect Antigenic Specificity T cell more conveniently. Methods The eukaryotic expression vector of a fusion protein was constructed by linking the sequence of the sKb- ZsGreen -6×His Tag by molecular cloning technique， and transfected into 293FT to express the protein，then purify it by Ni-affinity chromatography. Results Constructed an eukaryotic expression vector of MHC-Ⅰ- fluorescin tetramer and express and purify the protein. Conclusion The MHC-Ⅰ- fluorescin tetramer was produced and purified. Proved by Flow Cytometry，the tetramer could be recognized by B3Z after bound to β2 microglobulin and peptide OVA，it provided a convenient method for the detection of Antigenic Specificity T cells. Key words: MHC-Ⅰ; tetramer; eukaryotic expression MHCⅠ类分子由重链(H)、轻链(L)及抗原肽组成，其基本生物学功能是将抗原肽提呈给T细胞识别。1996年，Altmanet[1]首次报道将生物素化的MHC-肽复合物单体与荧光染料标记亲和素或链亲和素结合，生成四聚体复合物来检测HIV特异性细胞，与MHC-肽复合物亲和力这项技术在病毒性疾病[]、肿瘤[]以及自身免疫性疾病[]等研究中广泛应用基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）2006AA02Z416） Supported by the the National High Technology Research and Development Program (863 Program) of China (2006AA02Z416) 作者简介：熊锐华，男，湖北省应城市人，主治医师，硕士研究生，主要从事乙型肝炎的临床和机制研究。E-mail：xiongruihua@ 通信作者：张荣华