人β-NGF重组质粒转染GFP转基因小鼠BMSC的实验研究.pdfVIP

重庆医学 2014年 4月第43卷第 1O期 1161 · 论 著 · 人 ~-NGF重组质粒转染 GFP转基因小鼠BMSC的实验研究 刘强和 ，王亮亮 ，王 翔 ，王永宝 ，黄 鑫 ，邓 铭 ，刘芳贤 (桂林医学院附属医院／桂林医学院耳鼻喉研究所耳鼻喉一头颈外科，广西桂林 541001) 摘 要：目的 观察携带有人 口神经生长因子(NGF)重组质粒的骨髓基质干细胞(BMSC)的生物学特性。方法 培养小鼠 BMSC，采用脂质体 Lipofectamine 2000(Lip2000)转染方法将含有人 3]-NGF基 因的重组质粒转染至含有绿色荧光蛋 白(GFP)基 因的小鼠BMSC 中，利用酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法检测其 ~-NGF蛋 白的表达水平 。结果 采用脂质体 Lip2000转染方法 能成功地将 NGF重组质粒转染至BMSC，转染后细胞出现 NGF基因的表达，并且其表达的31-NGF蛋白能有效地保护转染过程 中对细胞的损害。结论 经转染后携带~-NGF基因质粒的小鼠BMSC仍有增殖、分化能力，并且具有 了I~NGF蛋白的表达能力。 关键词 ：神经生长因子；绿色荧光蛋 白质类 ；Lipofectamine2000；转染；小鼠；骨髓基质干细胞 doi：10．3969／j．issn．1671-8348．2014．10．003 文献标识码 ：A 文章编号：167卜8348(2014)10—1161—03 Experimentalstudyontransfeetionofhuman~NGFrecombinantplasmidintoBMSCsofGFPtransgenicmouse LiuQianghe，WangLiangliang，WangXiang，WangYongbao，HuangXin，DengMing，LiuFangxian (AffiliatedHospitalofGuilinMedicalUniversity／Otolaryn妇logy InstituteofGuilinMedicalUniversity，Guilin，Guangxi541001，China) Abstract：Objective Toinvestigatethebiologicalfeaturesofthemousebonemarrow stromalstem cells(BMSCs)transfeeted byhumanpnervegrowthfactor(~-NGF)．Methods BMSCsofGFPtransgenicmousewereisolatedandcultured．Thep—NGFre— combinantplasmidvectorsweretransferredintotheculturedBMSCsbyLipofeetamine 2000．TheexpressionofB_NGFwasdetec— tedwithELISA．Results TheI]-NGFrecombinantplasmidvectorsweresuccessfullytransferredintoBMSCsofGFPtransgenic mouse，theexpressionof~-NGFintransfectedceilsappeared．Inaddition，theexpressionof8一NGFcouldeffectivelyprotecttheBM— SCswhichwereinjuredintransfectionprocess．Conclusion BMSCsofGFPtransgenicmouseaftertransfectonwithhuman口一NGF havetheproliferatiOnanddifferentiationcapacity，andpossesstheexpressionabilityof NGF protein． Keywords：nervegrowthfactor；greenfluorescentproteins；Iipofectamine2000；transfection；mice；bonemarrow stromaIstem cells 骨髓基质干细胞(