人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中miRNAs表达谱筛选及鉴定.pdfVIP

· 212· 实用 口腔医学杂志 (JPractStomato1)2011Mar，27(2) 人牙髓干细胞 向成牙本质细胞定向分化过程中miRNAs表达 谱筛选及鉴定 张萍 朱聪惠 张纲 谭颖徽 摘【要】 目的：筛选人牙髓干细胞向成牙本质细胞定向分化过程中差异表达的microRNAs(miRNAs)并进行初步鉴定。方法： 体外分离 、培养和鉴定人牙髓干细胞，miRNAs芯片筛选牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中差异表达的miRNAs，并通过 TargetScan数据库预测靶基因，实时定量PCR法对结果进行初步鉴定。结果：人牙髓干细胞 vimentin、nestin、GFAP和 I型胶原 4种细胞表型均表达；成脂诱导3周后细胞内有油红O染色阳性脂滴出现；成牙本质诱导可见钙结节形成；基因芯片结果显 示，牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中，发生2倍以上表达变化的miRNAs有6条，其中上调3条，下调3条。通过miRNA 靶标预测工具预测靶基因，发现hsa—miR一633和hsa—miR一210有与牙髓干细胞分化相关的靶基因；realtime—PCR验证 hsa—miR一 633和hsa—miR．210表达变化与基因芯片结果相符。结论：人牙髓干细胞经诱导向成牙本质细胞分化过程中miRNAs表达谱具 有显著变化，为牙髓干细胞分化机制研究提供了新的提示。 【关键词】 miRNAs；牙髓干细胞 ；芯片；定向分化 ；成牙本质细胞 Screeningandidentification oftheexpressionprofileofmicroRNAsinhumandentalpulp stem cellsduring directionaldifferentiati0n iIltoodontoblasts ZHANGP几g，ZHUConghui，ZHANG ， Ⅳ~nghui．1．400037Chongqing，DepartmentofStomatolo— gY；XinqiaoHospital，China；2．InstituteofOncologyResearch，XinqiaoHospital， MilitaryMedicalUniversity A【bstract】Objective：ToscreenandidentificatethedifferentialexpressionmicroRNAs(miRNAs)ofhumandentalpulpstemcells (DPSCs)duringdirectionaldifferentiationintoodontoblasts．Methods：HumanDPSCswereisolated，cultruedandidentificatedin vitro，thedifferentialexpressionmiRNAsofDPSCswereexaminedduringdirectionaldifferentiationintoodontoblastsbymiRNAschip method．ThetargetgeneswereforecastedbytheTargetScandatabaseandidentificatedbyrealtime—PCR．Results：DPSCswerefound toexpressmanydifferentproteinsexaminedbyimmunohistochemistry，includingvimentin，nestin，GFAPandcollagentypeI．DPSCs couldbeinducedintoodontoblast—likeceHsandadipocyte—likecells．Duringdirectionaldifferentiationintoodontoblasts，therewere6 kindsofdifferentlyexpressedmiRNAsincluding3up—regulatedand3down—reuglated．Forecastedtargetgenesofhsa—miR一633and hsa—miR一210werefoundbytheTargetScandatabase，thetargetgeneswererelatedwiththedifferentiationofDPSCs．TheresultsofRT— PCR ofhsa—miR一633andhsa—miR一210wereaccordwiththoseofgenechi