依赖Ca-（2＋）的ATP过量释放在机械牵张所致气道上皮黏蛋白5AC高分泌中的作用.pdfVIP

第 41卷第 1期第 32页 华 中科技大学学报 (医学版) Vo1．41 No．1 P．32 2012年 2月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Feb． 2012 依赖 Ca2+的ATP过量释放在机械牵张所致 气道上皮黏蛋 白5AC高分泌中的作用* 苏晖晖 ， 尤列 ·皮尔曼。， 维克多 ·科罗索夫 ， 周向东 重庆医科大学附属第二医院呼吸 内科 ，重庆 400010 。俄罗斯医学科学院远东呼吸生理与病理研究所 ，布拉戈维 申斯克 675000，俄罗斯 摘要 ：目的 探讨人气道上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)释放量 的改变在机械通气所致气道黏液高分泌 中的作用 。方 法 人气道黏膜上皮细胞 (HBE16)体外培养 ，通过节律性倾斜细胞培养板 ，利用液体 的表面张力、大气压及液体重力所 产生的牵张力(剪应力)及压力 (压应力)给予压力牵张刺激 ，并利用 向密闭盒 中注入医用氧气增加压力 以模拟机械通气 ， 各组培养细胞依施加条件不同而分为对照组 、单纯倾斜组、倾斜+钙离子螯合剂 BAPTA-AM、倾斜+BAPTA—AM+钙 离子螯合剂EGTA、加压+倾斜 、加压+倾斜+嘌呤 P2Y受体阻断剂 reactiveblue一2(RB2)、加压+倾斜+ BAPTA— AM、加压+倾斜+ BAPTA—AM +EGTA，共 8组，分别采用 四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性、逆转录聚合酶链 反应 (RTPCR)检测各组黏蛋 白(MUC)SACmRNA表达水平 、EIISA法检测细胞培养上清液 中MUC5AC含量 、高效 液相色谱法 (HPIc)检测培养液 中ATP释放量 。结果 加压+倾斜组细胞 MUC5ACmRNA相对含量、培养上清液 中 ATP释放量和 MUC5AC蛋 白分泌量分别为 ：(11．8O±0．01)、(7．414-0．45)x／mol／g、(0．77-40．26)，显著高于单纯倾斜 组的(6．60±0．01)、(2．76-40．47)umol／g、(0．25±0．01)及对照组的(3．40±0．01)、(0．00-40．01)“mol／g、(0．02-40．01) (均 P0．05)。RB一2、EGTA + BAPTA—AM 处理后的加压+倾斜组细胞 的MuC5ACmRNA相对含量分别为 ：(10．5 ±0．03)、(11．9±0．11)，与加压+倾斜组相 比抑制作用不显著 (P0．05)；培养上清液 中ATP释放量分别为 ：(0．05± 0．02)／,mol／g、(O．08_--4-0．02)~／mol／g，较加压+倾斜组显著降低(均 P0．05)。结论 机械通气可 以显著提高气道黏膜 上皮 MUCSAC的分泌 ，其机制与气道上皮细胞依赖 Ca 的ATP的过量释放密切相关 。 关键词 ：机械牵张； 气道上皮 ； 三磷酸腺苷 ； 钙离子 ； 黏蛋 白 中图分类号 ：R563 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2012．01．007 EffectsofCa2+_dependentATP Over-releaseonHighExternalizationof M UC5AC inAirwayEpithelialCellsbyMechanicalStretching SuHuihui，JuliyM ．Perelman。，VictorP．Kolosov etal Departmento RespiratoryMedicine，SecondAffiliatedHospital，ChongqingUniversityofMedicalScience， Chongqing400010，China 。FarEasternScientificInstituteofPhysiologyandPathologyofRespiration，BZng08sf^Ps是675000，Russia Abstract 0hiective Toexploretheeffectsof