量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析金黄葡萄球菌.pdfVIP

承 德 医 学 院 学 报 VO1．31No．22014 量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析金黄葡萄球菌 彭 维 ，欧爱芬 (1．广州医科大学，广东广州 510182；2．广州市药品检验所) 关【键词】量子点；免疫荧光分析；金黄色葡萄球菌 【中图分类号]R378．1 文【献标识码】A 文【章编号]1004--6879(2014)02--0147-02 量子点 (Quantum Dots，QD)，又称半导体纳米晶体， 拌下滴加浓盐酸酸化至刚果红指示剂恰好变色；(4)室温静 能够接受激发产生荧光，因此，实际上是一种探针…。目前， 置 后，入4℃冰箱过夜保存；(5)收集白色固体物，干燥后用 在生物学领域QD应用较多的是 Ⅱ一Ⅵ族或Ⅲ一V族元素 水重结晶，再经真空干燥，所得物即为长臂生物素。 组成的纳米微粒 。链霉亲和素(streptavidin，SA)又称链 1．1．3 长臂生物素的活化：称取长臂生物素357mg溶于 霉抗生物素蛋白，具有高度的亲和力，其功能类似亲和素。 10mlDMF中，~ll30rngHOSU和适量缩合剂，室温搅拌下 生物素一亲和素系统(Biotin—AvidinSystem，BAS)有以 作用48h。滤纸过滤，收集滤液蒸发完全，加乙醚洗涤后，用 下特征 ：生物素与亲和素具有高度的特异的亲和性，桥 10-15ml无水异丙醇重结晶，所得粉末状固体即为活化长臂 联作用和多级放大作用。在量子点表面标记SA，利用生物 生物素。 素一亲和素系统，将制备得到的CdTe—SA标记物与生物 1．2 长臂生物素结合物的制备 (1)无水二甲亚砜(DMS0) 素化的抗体、核酸、受体结合，就可把量子点标记到细胞、 配制l0rng／n1l长臂生物素N一羟基琥珀酰亚胺酯溶液。(2)硼 核酸、蛋白质上，进行示踪检测和功能研究。本研究以量 酸盐缓冲液(0．1mol／L，pH8．8)配制浓度为lmg／ml的金黄 子点标记的链霉亲和素为标记试剂，将生物素一亲和素 葡萄球菌IgY抗体溶液。(3)按4：l的比例将生物素酯加入金 系统应用于荧光免疫分析中，建立了一种快速测定金黄 黄葡萄球菌 Y抗体溶液中，混合均匀并在室温下孵育4h。在 葡萄球菌的分析方法。 结合反应完成之前DMSO的终浓度不能低于5％，否则生物素 1实验方法和步骤 酯会出现沉淀。(4)将生物素结合金黄葡萄球菌 Y抗体溶液 1．1 长臂生物素的活化 生物素的分子量较小，预先活化 用PBS缓冲液透析，以除去未结合的生物素。由于生物素分 后，可使生物素噻吩环的戊酸侧链上的羧基与抗体、酶等生 子较大，故透析时间尽量较长，以纯化生物素化抗体溶液。 物大分子以酰胺键偶联。由于生物素与抗体或酶结合后极易 1．3 生物素化抗体的紫外分光检测 将1．2项制备好的生 受到大分子蛋白空间位阻效应(sterichindrance)的影响，使 物素化抗体溶液，通过紫外分光光度计全波长扫描测定制 用长臂生物素可以减少位阻效应，提高实验的灵敏度 。长臂 备的生物素化抗体的最大吸收峰值，同时比较金黄葡萄球 生物素是在生物素和N一羟基丁二酰亚胺之间添加2分子6-- 菌 Y抗体的紫外扫描图片。 氨基己糖，活化生物素的制备是获得高敏感度BAS制剂的 1．4 生物素化抗体的凝胶电泳鉴定 使用十二烷基硫 关键环节。长臂活化生物素(BCNHS)的制备过程分为两步： 酸钠一聚丙烯酰胺凝胶 电泳(Sodiumdodecylsaxlfate- 先制成生物素，再合成长臂生物并使其活化。 lmlyacrylamidegelek~-trophoresis，SDs_PAGE)对生物素 1．1．1 生 物 素N一羟 基 丁 二 酰