抗药性突变株的筛选.pptVIP

与筛选营养缺陷型突变株有关的三类培养基 基本培养基（MM）[-]：凡是能满足野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基。 完全培养基（CM）[+]：满足一切营养缺陷型菌株生长的天然或半合成培养基。 补充培养基（SM）[A]：在MM中有针对性地加入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷型菌株生长的合成培养基。 营养缺陷型诱变筛选步骤及方法 营养缺陷型的鉴定 诱变处理 营养缺陷型的浓缩 营养缺陷型的检出 缺陷型的浓缩 ①抗生素法 原理：青霉素、制霉菌素等抗生素作用于正常生长着的野生型微生物细胞，而对处于休止态的营养缺陷型细胞无作用。 方法：将菌培养在含抗生素的MM基中 ②菌丝过滤法 适用于：丝状（放线菌、霉菌） 原理：基本培养基上只有野生型孢子发育成菌丝；auxo孢子可通过滤膜，野生型菌丝不能通过。 ①逐个检出法 缺陷型的检出 ②影印平板培养法 ③夹层培养法 缺陷型的鉴定 生长谱法：是指在混有供试菌的平板 表面点加微量营养物，视某营养物的周 围有否长菌来确定该供试菌的营养要求 的一种快速、直观的方法。 * 野生型：从自然界分离到的任何微生物在其发生营养缺陷突变前的原始菌株。 营养缺陷型：野生型菌株经诱变处理后，丧失了某酶的合成能力，只能在加有该酶合成产物的培养基中生长，这类突变称为营养缺陷型突变株（简称营养缺陷型）。 原养型：营养缺陷型突变经回变或重组后产生的菌株，营养要求在表型上与野生型相同。 * 即淘汰野生型 例：青霉素法，适合于细菌。 青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，能杀死生长着的细菌，对休止态细胞无作用。 二 诱变育种 (一)自发突变与育种 生产中选育：生产中菌自发突变—及时选育出所需 性状正突变株。 定向培育：用某特定环境长期处理某微生物群体，同时不断对其移种传代，以达到累积并选择合适的自发突变体的育种方法。 卡介苗： 牛型结核杆菌 –牛胆汁、甘油、马铃薯培养基—移种230代（13年） 显著减毒结核杆菌(即卡介苗) (二)诱变育种 利用各种诱变剂处理微生物细胞，提高基因的随机突变频率，通过一定的筛选方法获得所需要的高产优质力株。 一般通过营养缺陷型突变株、抗阻遏和抗反馈突变型、抗性突变型（抗生素抗性突变株、条件抗性突变株）来筛选。 理化诱变剂—处理均匀、分散的微生物群体---提高突变率—巧妙筛选 诱变：随机过程 筛选：定向过程 诱变育种的实践意义 工业与实验室：代谢产物的高产突变株 生产角度：提高代谢产物的产量，减少杂质，扩大品种，改进产品质量，简化生产工艺 方法：简便易行，工作速度快，收效显著。 以选育高产突变株为例 1 .诱变育种基本环节(菌种筛选) 性能粗测 性能精测 挑变异菌于斜面培养基上 初筛 复筛 菌种保藏及扩大试验 菌种用于生产，并进行保藏 ?? 出发菌株 ? 培养液 ? 单个细胞或孢子悬液 ? 诱变剂处理 ? 平板分离 纯化，同步培养 离心收集细胞、洗涤，制菌 悬液，玻璃珠打散，过滤 活菌计数，诱变预备试验 存活细胞计数，计算致死率 变异率计算 2.诱变育种的步骤 （1）产量突变株的筛选 （2）抗药性突变株的筛选 （3）营养缺陷型突变株的筛选 3. 三类突变株的筛选 琼脂块培养法 产量突变株的筛选 方法：梯度平板法（gradient plate） 抗药性突变株的筛选 用梯度平板法筛选抗代谢拮抗物突变朱 作为菌株的遗传标记 作为生产菌种（结构类似物抗性变异株） 与营养缺陷突变有关的三类遗传型个体： 营养缺陷型：经诱变产生的一些合成能力出现缺陷，而必须在培养基内加入相应有机养分才能正常生长的变异菌株。如：lys -， bio- 野生型：自然界分离到的任何微生物，在其发生营养缺陷突变前的原始菌株，为该微生物的野生型。 如：lys + ; bio + ; 原养型 ：指营养缺陷型突变菌株回复突变或重组后产生的菌株，与野生型的表型相同。 营养缺陷型(auxotroph)的筛选 * 野生型：从自然界分离到的任何微生物在其发生营养缺陷突变前的原始菌株。 营养缺陷型：野生型菌株经诱变处理后，丧失了某酶的合成能力，只能在加有该酶合成产物的培养基中生长，这类突变称为营养缺陷型突变株（简称营养缺陷型）。 原养型：营养缺陷型突变经回变或重组后产生的菌株，营养要求在表型上与野生型相同。 * 即淘汰野生型 例：青霉素法，适合于细菌。 青霉素能抑制细菌细胞壁的合成，能杀死生长着的细菌，对休止态细胞无作用。