重组环糊精葡萄糖基转移酶温控型工程菌的构建及其培养 - 食品科学.pdf

※生物工程 食品科学 2014, Vol.35, No.11 155 重组环糊精葡萄糖基转移酶温控型工程菌的 构建及其培养条件的优化 * 凡 宁，张洪斌 ，凌 凯，凌国庆，胡雪芹 （合肥工业大学医学工程学院，安徽合肥 230009 ） 摘  要：采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction ，PCR ）法从蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus ）中扩 β β- β 增了 -环糊精葡萄糖基转移酶（ cyclodextrin glucanotransferase ， -CGTase ）基因，将该基因克隆到pBV220 E.coli α β E.coli 质粒中，转化 DH5 ，经氨苄青霉素抗性筛选和酶切验证后，得到能表达 -CGTase 的重组大肠杆菌 DH5 α/pBV cgt 。通过对工程菌产酶条件的优化，得到最佳产酶条件为：OD600 nm 值达到1.0 、初始培养温度 30 ℃、发酵培养基初始pH 8.0 、温度梯度诱导39 ℃培养0.5 h ，40 ℃培养0.5 h ，41 ℃培养1 h ，42 ℃培养 2 h 。酶活力由优化前的445 U/mL 提高到956 U/mL ，酶活力提高了1.15 倍。温度梯度诱导比直接诱导酶活力 提高20% 。该酶的克隆表达以及发酵条件的研究表明，该酶能在大肠杆菌原核表达体系中高效表达。 β 关键词：蜡状芽孢杆菌； -环糊精葡萄糖基转移酶；工程菌；表达；培养条件 Construction of Temperature-Regulated Recombinant Escherichia coli for β -CGTase Expression and Optimization of Culture Conditions * FAN Ning, ZHANG Hong-bin , LING Kai, LING Guo-qing, HU Xue-qin (School of Medical Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China) Abstract: The β -CGTase gene from Bacillus cereus was cloned in pBV220 plasmid after PCR amplification. The recombinant plasmid was transformed into E. coli DH5α. After ampicillin-resistance screening and restriction enzyme digestion analysis, we acquired recombinant E. coli DH5α/pBVcgt. The optimum fermentation conditions in shaking flask were acquired as follows: OD600 nm = 1.0, initial culture temperature 30 ℃, initial medium pH 8.0, and gradient-temperature induction at