以软刻技术微图案化培养纹状体神经元的形态学研究-生物化学与生物.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(6): 787~792 以软刻技术微图案化培养纹状体 神经元的形态学研究* 侃 刘丙方 徐群渊** ( 都医科大学北京神经科学研究所，北京市神经再生修复研究重点实验室，教育部神经变性病学重点实验室，北京100069) 摘要 探讨以软刻技术微加工带正电荷的聚乙烯亚胺(polyethyleneimine, PEI) 图案，对培养纹状体神经元黏附存活及突起生长 的影响 以软刻技术(微接触印刷方法)微加工三种不同的黏附底物：层粘连蛋白(laminin, LN) 、带正电荷的多聚赖氨酸 (poly-L-lysine, PLL)和PEI 新生乳鼠纹状体神经元体外分离培养，观察不同黏附底物对纹状体神经元黏附、存活和突起生长 状态的影响，观察神经元在不同黏附底物上形成网络图案的差异 结果表明，在PEI 和PLL 表面生长的神经元数量明显大 于LN 组，PEI 与PLL、LN 相比能形成更为完整的神经元图案 带强正电荷的PEI 有助于神经元在其表面形成相对完整的图 案，是构建体 神经网络的一种良好界面材料 关键词 聚乙烯亚胺, 软刻技术，纹状体神经元，细胞培养 学科分类号 R392.12，R319 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2008.00652 体 构建简化的神经网络模型在研究细胞生物 络、提高神经元纯度所 采用的无血清培养相悖 传感器、神经电信号、药物筛选以及神经科学基本 相反，依靠静电 附作用来促进细胞黏附可以很好 原理等诸多方面有巨大潜在意义[1, 2] 在体外按照 地解决无血清条件下细胞的黏附问题 所以，选择 设计的图案构建神经网络模型是当前本领域中需要 表面带正电荷的多肽聚合物如多聚赖氨酸(PLL)来 突破的重大关键问题 通过软刻技术在某种基底材 构建体 神经网络相对比较理想 但是，PLL 的多 料背景上印刷特定能促使细胞黏附并生长的物质 肽骨架在溶液中容易水解而导致培养神经元从基底 (如细胞外基质蛋白或一些大分子聚合物)，则可能 材料表面脱落 为了解决这个研究瓶颈，本实验拟 达到体 图案化培养神经细胞并使之形成网络的目 选择另一种带正电荷的物质聚乙烯亚胺(PEI)，试 [3] 的 软刻技术的原理是先用中间介质(如聚二甲基 探其是否能改善图案化培养神经细胞的作用 以往 硅氧烷PDMS)制成带有凹凸图形的弹性软印章， 一些实验已经证明，PEI 作为生物材料促进某些细 [4] [6～9] [10] 再把它经过光刻生成的微图案转移至基底材料上 . 胞黏附的能力比PLL 更有效 ；最近Herlem 等 所 的图案可以通过微米或纳米水平的微加工在材 发现，PEI 经过电化学氧化方法在铂金或硅表面可 料表面制成 利用软刻技术构建的几何图形加上印 形成一层超薄晶体膜，这种膜具有绝缘和pH 值敏 刷物质的化学特性，就可以人为地在空间上定向诱 [11～15] 感特性 ，因此，选用PEI 作为微接触印刷的材 导神经突起的生长，创建出所 的神经元网络 料更有利于将来在微电子器件上输入或输出信号， 模型 实现神经元与电子器件的通讯联系，在生物传感器 常选择用于印刷的生物大分子有细胞外基质蛋 研究中有极好的应用前景 但神经元在这种生物材 白和带正电荷的多肽聚合物 细胞外基质蛋白，例 料形成的图案上生长状态还缺少研究 为此，我们 如层粘连蛋白(laminin, LN) ，主要通过与细胞内整 合素(integrin) 的结合来实现细胞的黏附 这种受 * 国家自然科学基金资助项目.