五灵胶囊药效作用的有效成分.doc

　　五灵胶囊药效作用的有效成分 ：王胜春，胡咏武，王俊琴，李晓玮，贺雪梅 【关键词】 肝损伤 　　【Abstract】 AIM: To investigate the active ponents producing the pharmacodynamic effects in ETHODS: Liver cells odel of liver cell injuries acodynamic role of AO and MDA rose respectively to (881.8±231.7) nkat/L, (1256.9±265.1) nkat/L, (32.3±2.3) nkat/L and (1.0±0.6) μmol/L, ore marked than those in normal group (Plt;0.05). The drug serum in AO and MDA decreased respectively to (421.8±288.4) nkat/L, (980.2±113.4) nkat/L, (21.7±5.5) nkat/L and (1.5±1.0) μmol/L, notably loodel group (Plt;0.05). Four kinds of control substance markedly decreased the level of high enzyme activity that ol/L，与正常组比较（Plt;0.05）；五灵胶囊含药血清能有效地拮抗DGlaN对肝细胞损伤，细胞上清液中ALT，AST，MAO，MDA酶活性分别降低至(421.8±288.4) nkat/L，(980.2±113.4) nkat/L，(21.7±5.5) nkat/L，(1.5±1.0) μmol/L，显著低于模型组（Plt;0.05）；4种对照品能明显降低由DGlaN诱导肝细胞损伤时所致升高的酶谱活性水平，对DGlaN损伤的肝细胞有显著的修复和保护作用. 结论： 醇甲、乙素、隐丹参酮和丹参酮ⅡA是五灵胶囊阻滞肝细胞损伤的有效活性成分. 　　【关键词】 五灵胶囊；肝损伤；活性成分 　　0引言 　　五灵胶囊是治疗慢性肝炎的有效中药复方制剂［1］，其成分复杂产生药效作用的化学成分难以确定，这对该药质量标准制定的合理性和如何有效地控制产品质量带来了困难，因此探讨该药活性成分成为必要，本实验我们采用含药血清与对照品的细胞药效试验，并结合分析含药血清中化学成分，同时与对照品进行对照试验，来探寻五灵胶囊产生药效作用的化学成分. 　　1材料和方法 　　1．1材料 　　① 动物：SD大鼠，质量（200±20）g，♂（由第四军医大学实验动物中心提供），动物合格证号：医动证字SC×K（军）200205； ② 试剂与试药： D氨基半乳糖（DGLaN）：（重庆医科大学提供）；无酚红 DMEM培养基：（USA.Gibco公司产品）；新生小牛血清（NBS）（杭州四季青提供，用前56℃ 30 min灭活）；二甲基亚砜（DMSO）：（AR，华美物制品公司提供）；甲醇，异丙醇：（色谱醇，TEDIA公司产品）；五味子醇甲（醇甲）纯度：99 %、五味子乙素（乙素）纯度：98%、丹参酮IIA对照品纯度：99%（中国药品生物鉴定所提供）；隐丹参酮对照品由本室分离纯化制备并经氢谱（HNMR）确证，纯度：99%；五灵胶囊：（由西京医院药剂科生产，批号：020207）；③ 仪器：（BB16/贺利气体培养箱，德国HERAES公司）；美国illenium 32数据处理系统；日本岛津UV 2501型分光光度计；美国MD100生化分析仪. 　　1.2色谱条件Hypersil C18柱（5.0 mm×150 mm，5 μm）；柱温：室温；流动相：甲醇水（80∶20）；流速：0.8 mL/min；检测波长：270 nm，在此条件下能检出隐丹参酮、乙素、丹参酮IIA并达到基线分离，各成分保留时间隐丹参酮11.3 min、乙素12.9 min、丹参酮IIA 17.6 min.醇甲HPLC分析，流动相：甲醇水（13∶7）；色谱柱、流速、检测波长同上. 　　1.3含药血清的制备及含量测定取20 L/kg，含药血清Ⅰ组和Ⅱ组分别灌胃五灵胶囊药粉10.0 g/kg和6.25 g/kg，每日1次，连续3 d，第4日给药2 h后，乌拉坦麻醉(ip, 250 mL/L)，无菌操作腹主动脉取血，放置30 min，3000 r/min，离心20 min，分离血清. 含药血清Ⅰ组和Ⅱ组待测化学成分分析：取血清0.7 mL,加硫酸铵0.25 g，再加乙腈甲醇（4∶1） 4 mL，振荡抽提1 min，3500 r/min，离心10 min，