尾加压素Ⅱ促进晶状体上皮细胞增殖的实验研究.doc

　　尾加压素Ⅱ促进晶状体上皮细胞增殖的实验研究 ：黄秀榕，祁明信，李坤鹏，陈义 【摘要】 　　目的：探讨尾加压素Ⅱ (urotensin Ⅱ, UⅡ)对晶状体上皮细胞（lens epithelial cell, LEC）增殖的影响。方法：采用不同浓度的UⅡ与体外培养的LEC共同孵育后，用MTT法检测LEC的活性，并用3H 胸腺嘧啶（3HTdR）掺入法检测LEC增殖。 结果：109mol/L UⅡ组、108mol/L UⅡ组、107mol/L UⅡ组和106mol/L UⅡ组的吸光度值均显著高于对照组(Plt;0.05，Plt;0.05，Plt;0.01，Plt;0.01)。1010mol/L UⅡ组、109mol/L UⅡ组、108mol/L UⅡ组、107mol/L UⅡ组和106mol/L UⅡ组的3H掺入放射活性均显著高于对照组(Plt;0.01)，分别是对照组的1.36倍、1.40倍、1.45倍、1.59倍和1.66倍。呈浓度依赖关系。结论：UⅡ具有促进LEC增殖的作用。 【关键词】 尾加压素Ⅱ； 晶状体上皮细胞；增殖；后发性白内障 　　AbstractAIM: To study the effect of urotensin Ⅱ ( UⅡ)，a neethyl thiazolyl tetrazolium(MTT). The proliferations of LEC ol/L UⅡ, 108mol/L UⅡ, 107mol/L UⅡ and 106mol/L UⅡ ol/L, 109mol/L UⅡ, 108mol/L UⅡ, 107mol/L UⅡ and 106mol/L UⅡ es respectively, anner. CONCLUSION: UⅡ can induce proliferation of LEC.  　　KEYSO）系美国Amresco公司产品，DMEM培养基为美国GIBCO公司产品，2,5二苯基恶唑（PPO）及1,4双（5苯基恶唑基2）苯（POPOP）为 中国 医药集团上海化学试剂公司产品。全自动酶标读数仪(购自美国BioTek ELX808)。 　　1.2　方法 　　1.2.1　LEC活性的检测 　　取第3代培养的LEC，台盼蓝染色， 计算 活细胞数并调整细胞密度至5×108个/L，在37℃，5% CO2培养箱中常规培养24h，使细胞同步化。将实验分成6组，每组8个样本。对照组在LEC内加入DMEM培养液，1010UⅡ组，109UⅡ组，108UⅡ组，107UⅡ组和106UⅡ组分别在对照组基础上加入终浓度为1010mol/L,109mol/L,108mol/L,107mol/L和106mol/L的hUⅡ。置CO2培养箱中继续培养72h后，吸去培养液，每孔分别加入终浓度为0.5g/L的MTT 100μL。CO2培养箱中继续放置4h后，加入DMSO溶液100μL，振荡10min后室温下静置5min，于全自动酶标仪上用490nm比色测定吸光度A值。 　　1.2.2　LEC增殖的检测 　　取第3代培养的LEC并使细胞生长同步化。按照上述实验分组，分别加入不同浓度的hUⅡ，每组8个样本，CO2培养箱中继续培养12h后，吸去培养液，每孔分别加入3HTdR（其放射比活性为每孔3.7×104个/min），继续培养12h。吸去培养液，消化细胞并用真空泵抽滤，将细胞收集于玻璃纤维膜上。于60℃,30min条件下烘干滤膜，用液闪计数仪测定 3H放射活性。 　　统计学分析:用SPSS 12.0统计软件分析。所有结果用均数±标准差（±s）来表示。各组与对照组间数据比较采用t检验，各组间数据比较采用单因素方差OneC)增殖，使G0期细胞进入细胞周期。UⅡ还能促进实验大鼠心肌成纤维细胞、气道平滑肌细胞、肾系膜细胞发生增殖，且在一定的浓度范围内其促增殖作用具有浓度依赖性[4]。另有研究表明，UⅡ可刺激离体培养的大鼠胸主动脉VSMC发生增殖、呈浓度依赖关系。且降钙素基因相关肽、肾上腺髓质素、IL10等均能抑制由UⅡ诱导的VSMC增殖；UⅡ上调VSMC内皮素基因表达并促进VSMC内皮素的合成释放；肾上腺髓质素可浓度依赖性地抑制UⅡ刺激的VSMC内皮素mRNA水平的增加[46]。 　　经广泛查阅国内外 文献 ，有关UⅡ促进眼组织细胞增殖的研究尚未见报道，更未见UⅡ促进晶状体上皮细胞增殖的报道。本研究用不同浓度的UⅡ与体外培养的牛晶状体上皮细胞共同孵育，经MTT法检测发现UⅡ使LEC细胞活性显著增高；经3HTdR掺入法检测发现UⅡ能显著促进LEC发生增