用血管内皮细胞膜色谱模型研究9种药物的生物亲和作用.doc

　　用血管内皮细胞膜色谱模型研究9种药物的生物亲和作用 ：张典，袁秉祥，邓秀玲，杨广德，贺浪冲 【摘要】 　　目的 增加细胞膜色谱法的适用范围，构建血管内皮细胞细胞膜固定相，研究药物与血管内皮细胞膜上受体的生物亲和作用。方法 培养血管内皮细胞细胞株，制备细胞膜固定相，应用细胞膜色谱法研究九种药物与受体的亲和力。结果 九种不同的配体与受体的亲和顺序为：S(+)QNB、哌唑嗪、R(-)QNB、阿托品、育亨宾、BMY7378、(±)美托洛尔、山莨菪碱、东莨菪碱。其容量因子分别为：14.289、13.667、11.121、6.794、4.758、4.386、3.926、2.424、2.412。结论 血管内皮细胞膜色谱模型具有高度稳定性，可试用于药物的高效初筛。 【关键词】 细胞膜 色谱 血管内皮细胞 　　ABSTRACT: Objective To extend the application of cell membrane chromatography (CMC), the cell membrane stationary phase (CMSP) an umbilical vein endothelial cell (EVC304) are constructed. The chromatography affinity of drugs to receptors of EVC304 is investigated. Methods SP. The bioaffinity of nine drugs to receptors ethod. Results The affinity rank order of receptors obtained from CMC for the nine ligands bine, BMY7378, metoprolol, 6542, and scopolamine. The related kvalues embrane; chromatography; vascular endothelial cell 　　细胞膜色谱法(cell membrane chromatography, CMC)是以固定在硅胶表面的细胞膜为固定相，通过药物在固定相上的色谱行为有效地将药物的体内过程在体外进行模拟[13]。此法已被证明可用于研究药物与受体的相互作用和中草药中生物活性成分的筛选[46]。但是，用CMC法研究受体和筛选药物时，有时所需标本量太少并难以收集，还不能进行血管内皮细胞等散在分布细胞的研究和药物的筛选。为了增加CMC法的应用范围，本实验将CMC法与细胞生物学方法相结合，用人脐静脉血管内皮细胞ECV304制备细胞膜固定相(cell membrane stationary phase, CMSP)，建立了血管内皮细胞膜色谱模型，用CMC法首次研究了9种配体与内皮细胞上受体的生物亲和作用。 　　 1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 细胞 　　于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)的人血管内皮细胞株EVC304，由 中国 科学 院上海细胞研究所提供。 　　1.1.2 药品 　　阿托品(Atropine，分子量289.4)购自上海化学试剂采购供应站；R(-)QNB(分子量337.38)、S(+)QNB(分子量337.38)均购自RBI公司；东莨菪碱(Scopolamine，分子量384.3)、育亨宾(Youhimbin，分子量390.9)、BMY7378(分子量458.4)、哌唑嗪(Prazosin，分子量419.9)、(±)美托洛尔(Metoprolol，分子量267.38)均购自Sigma公司；山莨菪碱(6542，分子量386.29)购自山西晋西双鹤药业。 　　1.1.3 主要试剂 　　DMEM干粉培养基(GIBCO公司)、小牛血清(杭州四季青公司)、胰蛋白酶(Sigma公司)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、NaCl、盐酸(HCl)、磷酸(H3PO4)、乙醇(C2H5OH)等均为国产分析纯。 　　1.1.4 主要仪器 　　Gilson高效液相色谱系统，包括510泵、486型紫外检测器、7125型手动进样阀(美国Rheodyne)和Anastar色谱工作站(天津奥泰科技有限公司)；410型低温冷冻高速离心机(德国HERMLEZK)；AS5150A超声振荡仪(美国Auto science)；PHS2D型酸度计(上海第二分析仪器厂)；TB85型循环水浴(日本SHIMADZU)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 　　于人血管内皮细胞株ECV304，在3