石杉碱甲与POCD模型大鼠海马CA1区ChAT表达相关性的研究.docVIP

　　石杉碱甲与POCD模型大鼠海马CA1区ChAT表达相关性的研究 【摘要】 目的 探讨腹部的手术操作对老年大鼠学习认知能力的影响和海马CA1区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元的变化以及石杉碱甲干预的结果。方法 20月龄ethods 32 orris aze test ed on the 1st, 3 rd and 7 th day after operation, the animals mediately removed for determination of ChAT expression in CA1 region in hippocampus using immunohistochemistry.Results Morris aze test ed on the 1st day after operation, pared ming distance of groups A and C both extended (Plt;0.05).On the 3 rd day after operation, pared ming distance of group O, group Hup extended further, ming distance of group Hup shortened (Plt;0.05);pared ming distance of group O decreased on the 7 th day after operation. pared ean percentage of time and distance of group O spent sming in the quadrant shortened (Plt;0.05).pared pus of group O increased on the 7 th day after operation(Plt;0.05),pus of group C pairment appeared in the early stage after splenectomy on aged rats,ChAT expression in CA1 region in hippocampus upregulated, administering huperzine A 0.15 mg/kg for three consecutive prove the cognitive ability of rats pal,choline acetyltransferase 　　术后认知功能障碍(POCD)现在临床上广泛关注，老年人由于机体退行性变导致术后早期POCD的发生率大大增加，但其发生机制不甚清楚。脑内胆碱能系统在高级动物的学习记忆中起着重要作用[1]，但在POCD发生机制中的作用并不清楚。我们选择反映应胆碱能神经的胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)作为观察指标，旨在研究其与POCD发生发展的关系，探讨POCD的发生机制。另一方面，目前对POCD预防和治疗的有效性研究较少，为探讨对POCD的治疗策略，我们对脾切除术后大鼠认知障碍进行药物干预研究。以往研究表明石杉碱甲(huperzine A,Hup A)具有很好的抗衰老和改善学习记忆功能作用[2]，本文以神经生理学和组织细胞学两方面研究该药对脾切除术后大鼠认知障碍的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 药物与试剂 石杉碱甲(河南竹林众生制药公司)，氯胺酮(福建古田药业公司),山羊抗胆碱乙酰转移酶多克隆抗体(Goat AntiChAT,chemicon )。 　　1.2 动物分组及模型制备 20月龄雄性orris 水迷宫测试,将圆池内壁和平台漆成黑色点,通过自动图像拍摄系统记录游泳轨迹, 入水至找到平台为潜伏期,其总行程为游泳距离[3]。术前学习5 d,每天测试4次,取其平均值,术后1、3、7 d分别进行测试，并于术后7 d撤掉平台，记录60 s内大鼠在每个象限的停滞时间和在每个象限游泳的距离。 　　1.4 免疫组化染色 　　1.4.1 灌注和切片:大鼠行为学观察结束后，氯胺酮(25 mg/kg)腹腔麻醉动物,暴露心脏,先以0.9%生理盐水经升主动脉灌注冲洗后,灌注4%多聚甲醛溶液(pH=7.4)900 ml,持续2 h后取脑, 将脑置于20%蔗糖的PBS溶液中浸置24～48 h (4℃),冰冻冠状连续切片(厚度30 μm),海马组织每5张取1张。 　　1.4.2 免疫组化染色步骤:切片置于0.3 %Triton中浸30 min, PBS液洗3次,每次15 min;在稀释浓度为1∶2 000的山羊抗ChAT多克隆抗体中孵育72 h(4℃);