CYP1A1基因多态性及血清锌水平与非小细胞肺癌的关系.pdfVIP

现代预防医学2008年筇35卷第3期 Modern 1)Jeventive Medicine，2008，Vo1．35．NO．3 ·589 l-2．1 样品的收集 病例和对照均采集其静脉血．3 000 r／rain 2．2 病例与对照两组间血清锌水平比较及与NSCLC的关系的 离心分离血清和血液，血液采用盐析法 提取基因组DNA，进 分析 行CYP1A1基凶多态性检测。血清一20℃保存，用于测定锌。 2．2．1 病例组与对照细血清锌水平的比较 病例组血清锌水平 1．2．2 CYP1A1基因多态性检测 采用 PCR— RFLP检测 明显低于对照组，差异有统计学意义 (P0．01)。见表2。 CYP1A1 MspI基因多态性，PCR体系 (25 1)：Buffer 2．5 l， 表2 病例与对照两组间血清锌水平的比较 25 mmo1／L的MgC1 1．5 l，10 mmol／L的 dNTPs 0．5 Ixl，20 Ixmol／L的CYP1A1引物各0．3 l，DNA模板200 ng(2 1)， 组别 Taq酶1．5 Ll(0．3 1)，dd H20 17．6 l。CYP1A1引物序列上游 病例 78 64．88±43．88 (5 一3 )CA GTGAA GA GGTGTA GCCGCT，下游 (5，_一3 ) 对照 78 126．88±43．92 TA GGA GTCT TGrcTCA TGCCT。引物由上海生工生物工程技 ，=0．536．P：0．465：t=一8．820．尸=0．000 术服务有限公司合成。扩增条件为：94℃预变性5 rain，热循 环94℃50 s、54℃退火50 s、72℃50 s，35个循环，72℃延伸 2．2．2 血清锌水平与NSCLC的关系 将血清锌按照正常含量 7 min。PCR扩增产物酶切及电泳分析，总体积20 l：lOx 参考值 (12~18 Ixmol／L) 。 的上限值 117．0 mg／dL为界值，将 Buffer 2 ILl，BSA 2 l，MspI内切酶 1 l，PCR产物 15 l。 血清锌含量进行分层，转化为计数资料，分析血清锌水平与 37cc水浴中3 h．加入2 的上样缓冲液中止反应。溴化乙锭 NSCLC的关系 (表3)。血清锌 117．0 mg／dL者患NSCLC的 染色，1．8％的琼脂糖凝胶电泳，CYP1A1突变型可见 140 bp 危险性是血清锌≥117．0 mg／dL者的7．90倍，差异有统计学意 和200 bp两条荧光条带．杂合型可见 140 bp、200 bp、340 义 (P0．O1)。 bp 3条荧光条带，野生型仅见340 bp 1条条带，见图1。 表3 血清锌水平与NSCLC的关系 1O0 Ⅸ) 病例 78 70 8 3(×) 对照 78 41 37 = 26．10， ，】=0．000； OR=7．90， OR95Vd2I：314—20．46 注j M为Mark,~r，l、!、5、6、8、9为野生 3、4 々 台删 7为突变 223 血清锌水平与NSCLC分型及分期的关系 按界值 117．0 图1 CYP1A1基因分型结果 mg／dL将血清锌水平