hOGG1重组腺病毒载体在人视网膜色素上皮细胞的表达及其抗氧化应激作用研究.pdfVIP

医 学版 东南大学学报 ‘ JSoutheastUniv MedScEddi、 2。l5‘，，。ct；34。(＼5)／：7…‘83-7…88 Univ (MedSciE · 783 · hOGG1重组腺病毒载体在人视网膜色素上皮 细胞的表达及其抗氧化应激作用研究 周燕 ，高大庆 ，栾洁 (1．东南大学 医学院，江苏 南京 210009；2．东南大学附属中大医院 眼科 ，江苏 南京 210009) [摘要]目的：观察重组腺病毒pAd—CMV5一DEST-hoggl转染人视网膜色素上皮细胞ARPE-19后，高表达hOGG1 对视网膜色素上皮细胞在H202诱导的氧化损伤中的作用。方法：鉴定和包装重组腺病毒pAd—CMV5一DEST—hoggl 和腺病毒载体对照pAd／CMV／V5-GW／／acZ，并分别转染ARPE-19细胞。 0，(100pm．ol·L～，2h)干预转染重 组腺病毒的ARPE一19细胞 (RPE。Ad—hogg1)、转染腺病毒载体对照的ARPE-19细胞(RPE—Ad-lacZ)以及未 转染病毒的ARPE一19细胞。蛋 白免疫印迹法检测 3组细胞hOGG1的表达量；流式细胞仪检测细胞 内ROS 的生成量；免疫细胞化学方法检测氧化损伤标志性终产物8一羟基鸟嘌呤(8-oxodG)的形成量。结果：重组腺 病毒pAd-CMV5一DEST-hoggl包装成功，并在ARPE-19细胞中表达；高表达hOGG1的视网膜色素上皮细胞 较两对照组细胞显示出更少的ROS生成量 (P0．05)、更低 的8-oxodG氧化损伤程度 (P0．01)。结论 ：视 网膜色素上皮细胞hOGG1蛋 白高表达，可提高ARPE-19细胞碱基水平的修复能力。 [关键词]视网膜色素上皮细胞；人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶；8一羟基鸟嘌呤；氧化损伤 [中图分类号]Q786；R329．2 [文献标识码]A [文章编号]1671—6264(2015)05—0783—06 doi：10．3969／i．issn．1671’6264．2015．05．022 Theexpressionofrecombinantadenovirus。hOGG1vectorinhuman retinalpigmentepithelialcellsanditsanti。oxidativeeffect ZHOUYan ，GAO Da。qing ，LUAN Jie (1．SchoolofMedicine，SoutheastUniversity，Nanjing210009，China；2．DepartmentofOphthalmology， ZhongdaHospital，SoutheastUnivemi~，Nanfing210009，China) [Abstract]Objective：TostudytheeffectofhOGG1onhumanretinalpigmentepithelialcellsinH2O2induced oxidativestress．byobservingpAd。CMV5。DEST。hoggltransfectingAPRE。19．Methods：Constructrecombinant adenoviurspAd。CMV5 ‘DEST。hoggl，controladenoviursvectorpAd／CMV／V5一GW ／lacZ，andtransfectthem into ARPE-19cells(RPE-Ad。hoggl，RPE’Ad—lacZ)respectively．Thetwocelllines，togetherwithanormalARPE。19 cellstrain，weretreatedbyH2O2(100lxmol·L～，2h)．Theoxygenfreeradicals(ROS)productionwasdetected byFlowCytometry(FCM)．Immunohistochemistyassessed8oxoguanine(8。oxodG)，whichistheoxidativedamage endproducts．Results：Theconsturctionandpackagingofrecombinantadenoviurs‘hogglvectorweresuccessful， [收稿 日期]2015—03-03 [修回日期]2015