HPLC-MS%2fMS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究.pdfVIP

第32卷 第3期 中山大学学报 (医学科学版) V01．32 No．3 2011年 5月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mav． 201l HPLC．MS／MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究 张珍真 ，王佳佳 ，谭炳炎 ，王 娴 ’，郑 琳 ，常 颖 ，朱惠莲 (中山大学公共卫生学院1．营养学系；2．卫生检验与检疫专业；3．实验教学中心，广东 广州 510080) 摘 要：【目的】建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC—MS／MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平，并研究血浆中两种物 质的稳定性。【方法】以dg-氯化胆碱、d9-甜菜碱为内标，血浆经乙腈除蛋白后，采用SiO：柱(2．1mm×100mm，5m)乙腈一甲 酸铵缓冲液(15mmol／L，pH=3．5)等度洗脱，经电喷雾电离，选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。 结【果】血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离，最低定量限均为0．62Ixmol／L，线性范围均为0．62—400Ixmol／L。对游离胆 碱的测定，日内相对标准差 (RSD)为5．10％～5．85％，日间RSD为4．54％一13．26％，回收率94．15％一103．70％；对甜菜碱的测 定，日内RSD为 3．60％～7．30％，日问RSD为 2．70％～8．10％．回收率 90．03％～103．88％。稳定性研究中，游离胆碱和甜菜碱 浓度随保存时间及温度增加，游离胆碱在血浆分离48h内变化小于 15％，甜菜碱超过3h后变化即大于 15％。3个反复冻融 循环内游离胆碱浓度稳定；甜菜碱变化明显，第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍 。【结论】高效液相色谱串联质谱法 同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中 甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。 关键词：血浆 ；甜菜碱；游离胆碱；稳定性；高效液相色谱串联质谱 中图分类号：R151．2 文献标志码：A 文章编号：1672—3554(2011)03—0406—05 QuantitativeMeasurementandStabilityStudyofBetaineandFreeCholineinHuman PlasmabyLiquidChromatographyTandem M assSpectrometry ZHANGZhen—zhen，WANGJia-jia，TANBing-yan，WANGXian，ZHENGLin，CHANGYing，ZHUHui—lian (1．FacultyofNutrition，2．DepartmentofInspectionandQuarantine，3．ExperimentalCenter，SchoolofPublicHealth，Sun~at—sen University，Guangzhou510080，China) Abstract：O【bjective]Toestablishamethodforthequantitativemeasurementofbetaineandfreecholineinplasma simultaneouslyusingliquidchromatographytandemmassspectrometry(HPLC—MS／MS)andtostudythestabilityofthetwoanalytes inplasma．M【ethods】Separationwasachievedonanormal—phasesilicacolumn(2．1mmx100mm，5 m)withacetonitrile／15 mmol／Lformicaicd (6：4v／v) underisocraticelution． Amassspectrometry wasappliedtomeasuretheobjectiveanalytes． Acetonitrile，containedd9-cholineanddg-betaine，asinternalstandards，wasaddedintopl