IGF-Ⅱ基因RNAi慢病毒载体构建与稳定转染细胞株建立.pdfVIP

广西医学 2012年6月第34卷第6期 677 IGF一11基因RNAi慢病毒载体构建与稳定转染细胞株建立▲ 杨翠英 罗佐杰 (广西医科大学第一附属医院内分泌科，南宁市 530021；E-mail：ycymoment@163．corn) 【摘要】 目的 构建人的IGF—II基因RNA干扰慢病毒载体并建立人肾上腺皮质瘤细胞株SW．13稳定转 染细胞株。方法 根据人的IGF—I1基因序列，设计3条针对IGF—II．shRNA序列，分别构建pLLU2G—shlGF．1I3 个慢病毒载体。筛选出最有效沉默靶基因的shRNA后，将携带 目的序列的慢病毒载体转染到293FT细胞 中， 感染人肾上腺皮质瘤细胞株SW-13，建立稳定转染细胞株。结果 设计的针对 IGF．Ⅱ的序列中第 3条的抑制 效果最好，下调 80％。以此 目的序列构建稳定转染细胞株，对 IGF—I1mRNA抑制率达95％。结论 成功构建 表达人肾上腺皮质瘤IGF—II—shRNA的慢病毒载体，它能有效沉默 IGF．1I基因在人肾上腺皮质瘤细胞株SW．13 中的表达并建立稳定转染细胞株。 【关键词】 IGF一11；RNAi；SW一13；shRNA；慢病毒载体；转染细胞 【中图分类号】 R586 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253-4304(2012)06-0677-04 ConstructionofIGF·lIRNA InterferenceLentiviralVectorandEstablishmentofItsStablyTranstectedCellLine YANGCui—ying，LUOZuo_j (DepartmentofEndocrinology，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China) 【Abstract】 objective ToconstructtheIGF一1IRNAinterferencelentiviralvectorandestablishthestably transfectedhumanadrenocorticaltumorcelllineSW．13．Methods Accordingto山eIGF—lIgenesequence．threeshRNA targetingIGF—l1weredesigned，andthecorrespondingpLLU2G-shlGFrecombinantplasmidswereconsturcted．After themosteffectiveshRNA wasachieved，theshuttleplasmidpLLU2G—shIGFwith lentiviralpackagingplasmidwas mixed．and293FT cellsweretransfected．ViurssolutionwascollectedtoinfectSW ．13cells，andthestablytransfected celllinewasestablished．Results ThethirdshRNA sequencetargetingIGF—IIshowedthebestgenesilencingeffect as80％ ．andthestabletrnasfeeted celllinewasconsturctedsuccessfullybasedonthissequence，andtheinhibition ratiowas95％ forIGF一11mRNA．Conclusion ItissuccessfultoobtainIGF．1I．shRNA lentiviralvectorthatcan effectivelydown．regulatetheexpressionofIGF．1Iinhumna adrenocorticaltumorcelllineSW．13andestablishthe stablytransfectedcellline． 【Keywords】 IGF-lI；RNAi；SW一13；shRNA；Lentiviralvector；T