TNF-α活化人瘢痕疙瘩成纤维细胞NF—κB的实验研究术.pdfVIP

中国病理生理杂志 Chinese Journal of Pathophysiol 墨 丝i 2； 二 · l65· [文章编号】 1000—4718(2008)01—0165—04 TNF一0【活化人瘢痕疙瘩成纤维细胞 NF—KB的实验研究 朱桂英 ， 徐 斌 ， 张 捷 ，蔡景龙 ( 北京军区总医院263临床部烧伤科，北京 101149； 山东大学第二医院整形美容烧伤中心，山东 济南250033； 山东省立医院分子生物学实验室，山东济南250014) [摘 要】 目的：观察肿瘤坏死因子一a(TNF—Ot)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)以及正常皮肤成纤维细胞 (NSF)核因子一kappa B(NF—KB)的影响，以探讨瘢痕疙瘩的发生机制。方法：原代培养成纤维细胞；免疫荧光技 术观察NF—KB 065和IKB～Ot在静息状态和TNF—Ot刺激后的成纤维细胞中分布；应用TransAM NF—KB 065 kit 试剂盒检测NF—KB 065 DNA结合活性；应用Western blotting检测IKB—Ot蛋白水平。结果：TNF—Ot刺激后， NF—KB 065从细胞浆转移至细胞核；NF—KB 065 DNA结合活性水平在刺激后1 h达到高峰，4 h接近正常；细胞浆 IKB— 蛋白水平在刺激后15 min降至最低值，4 h基本接近正常；KFB较NSF对TNF—Ot的刺激更为敏感。结论： KFB较NSF对TNF—Ot活化 NF—KB更为敏感，可能是瘢痕疙瘩形成的潜在发病机制。 [关键词】 瘢痕疙瘩；NF—KB；肿瘤坏死因子 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A NF—w,B activation in keloid fibroblasts stimulated with TNF—Q ZHU Gui—ying。 XU Bin ，ZHANG Jie ，CAI Jing—long2 ， ( Department of Plastic and Burns Surgery of 263 Hospital of Beijing Military Hospital，Bering 101149，China； Department ofPlastic and Burns Surgery．The Second Affiliated Hospital of Shandong University，Jinan 250033，China； Department ofMolecular Biological Laboratory of Shandong Provincial Hospital，Jinan 250014，China．E—mail：caijin— along@126．com) [ABSTRACT] AIM：To investigate NF—KB 065 activation and IKB—Ot expression in keloid fibroblasts(KFB) and normal skin fibroblasts(NSF)stimulated with TNF—Ot and to explore the underlying molecular pathogenesis of keloid formation．METHODS：Primary KFB was cultured．The location of NF—KB 065 and IKB—Ot in KFB and NSF at quies— cent condition and the nuclear translocation of NF——KB 065 after TNF——Ot stimulation were observed by immunofluorescence technique．NF—KB 065 DNA binding activity Was detected with TransAM。 NF—KB 065 kit．Th e IKB—Ot