miR-19a靶向TP53INP1介导肠癌5-Fu耐药的机制.pdfVIP

· 3234 · 广东医学 2013年 11月第 34卷第 21期 GuangdongMedicalJournalNov．2013，Vo1．34，No．21 miR一19a靶 向TP53INP1介导肠癌 5一Fu耐药的 机制术 陈淑 兰 ，刘利艳 ，刘丽娟 ，钟军 南昌大学医学院(南昌330006)；江西省肿瘤医院 (南昌330029) 摘【要】 目的 初步探讨miR一19a通过靶向TP53INP1介导结肠癌HCT8细胞对5一Fu的耐药机制。方法 利用qRT—PCR检测 5一Fu耐药细胞株 HCT8／Fu及敏感细胞株 HCT8中miR一19a的表达差异；MIT法检测 miR一19a对细胞 5一Fu药物敏感性的影响；双荧光素酶报告基 因系统对miR一19a与TP53INP1的靶基因关系进 行鉴定；Westernblot检测miR一19a对TP53INP1表达的影响。结果 HCT8／Fu中miR一19a的表达量是 HCT8细 胞的7．12倍，显著高于敏感HCT8细胞株的表达量(P0．05)；HCT8转染miR一19amimics后，细胞的半数抑制浓 度 明显高于转染阴性对照的细胞(P0．05)；TP53INP1是 miR一19a的靶基 因，能显著降低野生型 TP53INP13 一 UTR荧光素酶活性 (P0．叭)；转染miR一19amimics显著降低TP53INP1的表达(P0．05)。结论 miR一19a 可能通过靶 向TP53INP1介导肠癌细胞对 5一Fu的耐药。 【关键词】 miR一19a；5一Fu；肠癌；耐药 Them ／R 一19a inducesresistanceto5一fluorouracilbyaffectingtumorprotein53一inducednuclearprotein lin HCT8coloncancercells． CHENShu—lan ，LIULi—yan， f／Li—juan，ZHONGJun． MedicalCollegeofNan— chang University，Nanchang330029，China Correspondingauthor：LIULi—juan．E—mail：liu_lijuanpharm@163．corn，ZHONGJun．E—mail：zhongdun@medmail．corn 【Abstract】 Objective ToinvestigatetheeffectsofmiR一19aontumorprotein53一inducednuclearprotein1 (TP53INP1)一inducedresistanceto5一FuinHCT8coloncancercells．Methods Therealtmiefluorescencequantita— tivePCR (qRT—PCR)wasusedtoassessethemiR一19aexpressioninHCT8cellsand5一Fu—resistantHCT8／Fu cells．Drugsensitivityto5一Fuaftertransfectionwastested usingMTT assay．Thecorrelationbetween miR 一19a and TP53INP1wasanalyzedbyusingdual—luciferasereporterassay．TheproteinexpressionofTP53INP1aftertransfection wasmeasuredbyWestern blot．Results Significantup—regulationofmiR 一19aby7．12一foldwasobservedin the 5一Furesistantcells(HCT8／Fu)thanthatinHCT8cells(P0．05)．AftertransfectionofmiR一19amimicsinHCT8 cells，thehalfinhibitionconcentration(IC50)of5一Fuwassignificantlyhigherthanthatinnegativecontrolgroup(P 0．05)．TP53INP1wasthetargetgeneofmiR一19a，whichsignificantlyreducedtheluciferaseactivitycontainingthewild— typeTP53INP13一UTR(P0．01)，andfurtherdown—regulatedtheexpr