莱芜地区乙型肝炎病毒基因型及临床意义的研究.docVIP

　　莱芜地区乙型肝炎病毒基因型及临床意义的研究 我们应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性基因分型的方法对莱芜地区人群HBV基因分布进行研究,在分子水平阐明不同基因型的流行。探讨莱芜地区基因型的分布、基因型与病毒康墓叵怠⒒蛐陀肓俅脖硇偷墓叵担蛐陀際BeAg的关系，更好地了解莱芜地区优势流行株及不同基因型复制能力与毒性,为以后指导临床病情分析及 治疗 提供理论依据。 1材料与方法 1.1研究对象 血清标本来自我院的HBV-DNA阳性的乙肝病毒感染者136例,其中男104例,女22例,年龄11～74岁。诊断根据2000年西安会议修订的标准[2],其中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)17例,慢性乙型肝炎(CHB)轻度21例,中度38例,重度14例,重型肝炎(FH)15例,肝硬化(LC)22例,肝癌(HCC)9例,所有患者均排除其他病毒性肝炎及自身免疫性肝炎。留取清晨空腹静脉血,分离血清,血清分别冻存于-70℃及-20℃冰箱备用。 1.2方法 1.2.1血清标志物检测应用化学发光法,其操作及判定方法严格按照说明书进行。 1.2.2乙型肝炎病毒DNA定量检测采用实时跟踪荧光定量PCR，检测下限为1.0×103copies/ml,具体操作如下:血清标本100ul加入50ul裂解液,96℃10min，12000g离心10min,取上清加入10×PCR扩增系统管中,同时设置阴性对照和阳性对照,放入PCR仪中,使用说明的PCR程序(95℃2min,然后95℃15s、52℃40s)进行40个循环,反应结束后,通过电脑分析直接定量结果,专人操作。 1.2.3HBV基因分型采用限制性片段长度多态性分析(RFLP)及序列测定法, 参考 文献 所述方法进行。 1.3试验结果的统计学处理 用SPSS10.0软件,计量资料采用t检验，样本构成比的比较采用x2检验，多个均数间的比较采用单向方差分析，年龄呈非正态分布,取对数后呈正态分布,采用两样本均数比较。 2结果 2.1136例HBV感染者基因型分布情况及HBVDNA载量水平 莱芜地区HBV感染者基因型以C型为主，占68.4%（93/136），B型占19.1％（26/136），B+C混合型占12.5％(17/136)，未发现A、D、E、F、G、H型。病毒载量均值从B型、混合型到C型依次升高,B型载量水平显著低于C型及混合型;C型及混合型间比较无差异(单向方差分析F=12.18,Plt;0.01)。 2.2HBV感染者基因型与年龄的关系 从HBV携带者到慢性乙型肝炎轻度、中度、重度以及重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌，年龄逐渐增大。在HBV携带者和轻度慢性乙肝患者组中，C型、混合型与B型年龄比较，差异有显著性(Plt;0.01)，说明C型、混合型乙型肝炎病毒感染者较B型感染者年龄大，其他组未见明显差异(Pgt;0.05)。 2.3HBV感染者基因型与性别的关系 各基因型中男性患者均多于女性,但男性、女性各种基因型构成比经统计学处理，均无显著性差异(Pgt;0.05)。 2.4临床表型与基因型的关系 B型中ASC比例（30.9%）显著高于C型、混合型ASC比例（9.7%、0%），x2=8.32,Plt;0.01。 B型中CHB轻度所占比例（26.9%）显著高于C型、混合型CHB轻度比例（12.9%、11.8%），x2=4.57,Plt;0.05。在CHB重度、重型肝炎、肝硬化患者中，B型的比例显著低于C型、混合型，x2值在3.89-10.64之间，P值均小于0.05。C型基因型在HBV携带者、慢性乙型肝炎轻度、中度、重度以及重型肝炎、肝硬化的比例依次升高，分别为52.9%、57.1%、69.6%、71.4%、73.3%、77.3%，提示C基因型与严重肝损害有关。 2.5B型、C型和HBeAg的关系 在慢性乙肝病毒感染者中，C基因型患者HBeAg阳性者显著高于B基因型患者，x2=10.38，Plt;0.01。混合型由于例数较少，未列入统计。3讨论 HBV的流行情况除与病毒本身的生物学特性如血清型、基因型、基因变异等有关外，还与卫生状况、生活习惯以及人体免疫遗传特征等因素有关。不同基因型的HBV的复制能力和逃逸宿主免疫压力的能力不同,从而导致不同地区HBV感染率和基因型分布呈一定的地理流行病学特征。国内外研究证实，HBV感染者基因型分布呈现明显的地域性差异，反映了HBV 自然 感染过程中的变异特点和病毒基因遗传性的差异，是病毒进化的结果。近年来，国内外学者已做过关于基因型的研究，在疾病进展的不同阶段中，不同基因型的感染不一样，认为基因型与HBV的传播方式、临床经过、病情转归以及临床疗效有一定的关系。经河北、湖南、广西、广州、兰州、吉林、江苏、香港等地的研究表明[3],我