NGAL重组蛋白的表达与纯化及其促进结肠癌转移的研究.pdfVIP

成都医学院学报 2015年第 1o卷第 2期 JournalofChengduMedicalCollege，2 !y ． ! ． 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／51．1705．R0938．003．html doi：10．3969／j．issn．1674—2257．2015．02．003 · 论 著 · NGAL重组蛋 白的表达与纯化及其促进 结肠癌转移的研究* 刘 桦 ，杨晓龙 ，唐 丽 ，胡开锋 ，刘明佳 ，刘 戟 1．四川大学华西基础 医学与法医学院 生物化学与分子生物学教研室(成都 610041)；2．成都医学院 生物 医学系(成都 610500) 【摘要】 目的 研究 NGAL重组蛋 白促进人结肠癌细胞 SW480转移的作用机制。方法 通过基因工程方法 构建重组表达载体 pet32a—tev—NGAL，转化大肠杆菌 (BL21一DE3)进行表达 ；采用亲和层析纯化 ，并用 tev酶进行酶 切获得 NGAL重组蛋 白；Transwell与基质胶实验检测 NGAL对细胞迁移、侵袭能力 的影响；Westernblot检测 NGAL对肿瘤转移相 关蛋 白表达 的影 响；ELISA检测 不 同肿瘤分期 结肠癌患者 血液 中NGAL表达情况 。 结果 成功构建 pet32a—tev-NGAL原核表达载体 ，并通过体外表达与纯化获得 NGAL重组蛋 白；该蛋 白促进 SW480的迁移和侵袭 ；Westernblot检测结果表明，NGAI激活 EMT信号通路 ；ELIsA结果表明，NGAL表达量 与肿瘤恶化程度成正相关。结论 NGAI通过激活 EMT信号通路促进结肠癌细胞 SW480转移 。 【关键词】 NGAL重组蛋 白；结肠癌细胞 ；肿瘤转移 【中图分类号】 R735．35 【文献标志码】 A Expression andPurificationoftheRecombinantNGAL Protein and ItsPromotionoftheM etastasisoftheHumanColon Cancer LiuHua ，YangXiaolong ，TangLi，HuKaifeng ，LiuMingjia ，LiuJi ．1．Departmentof Biochemistry and MolecularBiology，WestChina Schoolof Preclinicaland ForensicMedicine，Sichuan University，Chengdu610041，China；2．DepartmentofBiomedicalSciences，ChengduMedicalCollege，Chengdu 610500，China [Abstract] Objective Toinvestigatethebiologicalfunctionsandmechanismsofrecombinantneutrophil gelatinase—associatedlipocalin (NGAL)protein-inducedColorectalcancercellsSW480metastasis．M ethods Pet32a— tev—NGAL recombinantexpressionvectorwasconstructedandtransferredintoE．coliBL21．Thefusionproteinwas purifiedbyaffinitychromatographyanddigestedbythetevenzymetoobtain NGAL protein．TheeffectofNGAI proteinontheinvasiveabilityofmetastasiswasdetectedbyTranswellandMatrigelexperiments．NGAL expression wasd