RNA干扰沉默 survivin基因对 Eca-109细胞增殖与凋亡的影响.pdfVIP

JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) Nov． 2015 Vo1．5Q ．鱼 · 737 · doi：10．13705／j．issn．1671—6825．2015．06．002 RNA干扰沉默 survivin基因对 Eca-109细胞增殖与凋亡的影响 牛朝霞△，李宁宁，陈 洁，李宜培，彭蕤蕤，秦紫芳 河南医学高等专科学校病理生理学教研室 郑州 451191 △女 ，1979年 10月生 ，硕士 ，讲师 ，研究方 向：恶性肿瘤功能基因组学 ，E—mail：nzx99@163．com 关键词 RNA干扰 ；survivin；细胞增殖 ；细胞凋亡 ；Eca一109细胞 中图分类 号 R735．1 摘要 目的：通过 RNA干扰抑制食管癌细胞 Eca．109survivin基因的表达 ，观察 survivin基 因沉默对 Eca-109细 胞增殖与凋亡 的影响。方法 ：构建靶 向survivin基因的 siRNA表达载体并借助脂质体稳定转染 Eca一109细胞 (干扰 组)，同时设转染无关干扰质粒的 Eca-109细胞为 阴性对照 ，未转染细胞为空 白对照 。采用 Westernblot检测 sur— vivin基 因沉默效果 ，MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术分析干扰前后 Eca一109细胞增殖与凋亡 的变化 。结果 ： 与两对照组相 比，干扰组 Survivin蛋 白的表达降低 (F=79．397，P0．001)；MTT检测结果显示 ，干扰组抑制细胞增 殖效果优于两对照组，而平板克隆形成实验显示干扰组克隆形成率低于两对照组 (F=162．026，P0．001)；流式细 胞术分析显示 ，干扰组凋亡指数高于两对照组 (F=2284．205，P0．001)。结论 ：RNA干扰可特异性沉默 survivin 基 因的表达 ，抑制 Eca一109细胞 的增殖 ，诱导细胞凋亡 。 Effectsofsilencing survivin geneby RNA interferenceonproliferation andapoptosisofEca一109cells NlUZhaoxia。LINingning，CHENJie，LIYipei，PENGRuirui，QINZifang DepartmentofPathophysiology，HenanMedicalCollege，Zhengzhou451191 Key words RNA interference；survivin；cellproliferation；cellapoptosis；Eca一109 cell Abstract Aim ：To inhibitendogenoussurvivinexpressionbyRNA interferencetechnologyandinvestigatetheeffects onproliferationandapoptosisofEca一109 cells．Methods：An siRNA expressingvectortargeting survivinwasconstructed and transfected intoEca-109 ce11sviaLipofectamine 2000 t0 establish stabletransfection ce11line．TheEca-109 ce11s transfectednon—sensesequenceand thoseuntransfectedwereusedascontro1．Theexpression levelofSurvivinproteinwas detectedbyW esternblottoobservetheinterferenceeffect；cellproliferationofEca一109cellswasdeterminedbyMTT assay andcolonyformationassay；cellapoptosisofEca一109cellswasmeasuredbyflow cytometryanalysis．Results：Compared withthe2controlgroups，theexpressionlevelofSurvi