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螺旋霉素提取
溶酶萃取法提取螺旋霉素 螺旋霉素理化性质及结构 螺旋霉素(spiramycin)是十六碳大环内酯类抗生素,是由生二素链霉菌(S.ambofaciens)所产生的。 螺旋霉素是多组分的抗生素,其主要成分有螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。其化学结构如图1所示。 图1 抗生素提取工艺 提取的过程就是浓缩和纯化的过程,因为发酵液体积大,抗生素浓度低,用一步操作往往是不能满足要求的,因此提取常分几步进行。其中以第1步最为重要,因为第1步处理的体积最大,浓度最低。以后几步处理的体积小,浓度也高,操作易控制。在提取前,需进行发酵液的预处理,便于以后的提取。 抗生素常用提取方法 溶酶萃取法、离子交换法、吸附法、沉淀法。一般采用溶酶萃取法,通过对发酵液的预处理,过滤再离心分离得到BA萃取液,洗净再提取分离得到磷酸缓冲液,再过滤结晶,真空干燥最后得到抗生素成品。 螺旋霉素提取方法 螺旋霉素发酵液的提取采用溶酶萃取法, 步骤如下:发酵液→净化液→滤液→水提液→水洗液→水提液→脱溶液→结晶液→湿晶体→干燥→成品→包装入库。 螺旋霉素的提取过程 1.发酵液预处理:将发酵液加1.0%~1.5%的硫酸铝并调节pH值4.5~5.0,搅拌,静止,使蛋白质充分沉淀。 2.过滤:发酵液首先通过板框过滤机过滤。各板框机的进料压力相同,过滤压力最初不得超过0.03 MPa,待每个出料嘴都出料后可以提高至0.05 MPa,滤速减慢,至0.10~0.15 MPa,整批过滤完后,用3.5~4.0 m3/次的水顶洗,用30%(V/V)低单位(400 U/mL以下)酸水顶洗。接着过滤液由水输送至滤液贮池,滤液再通过泵送至混合萃取罐。 3.醋酸丁酯提取:用5moL/L NaOH调过滤液pH值8.5~9.0,将醋酸丁酯泵入混合萃取罐。启动搅拌机搅拌(80~100r/min)混合后静置分层。若干小时后,如出现乳化层,则用高速离心机将丁酯相和水相分开。 4.水洗:丁酯提取液由萃取罐泵送到水洗罐。然后用40℃、50%(V/V)无盐水洗涤2次,每次洗涤均间歇搅拌(转速80~100r/min)1 min,重复3次,静置分层40~60 min,当放水至乳化层为白色时为止。 5.水提:水洗后再泵入水提灌。按水提液为30000~50000 U/mL计算无盐水。用量:用1moL/L氯化氢和0.05mmoL/L磷酸二氢钠缓冲液调pH值为2.0~2.5,与丁酯提取液混合搅拌1min,重复3次,静置分层40~60 min,分2次提取,合并2次水液,用真空泵抽到脱溶罐。 6.脱丁酯:水提液通过真空泵缓缓输入脱丁酯罐。用1moL/L氢氧化钠回调pH值5.0~5.5,加碱液要慢,防止局部结膜,用0.02 MPa干净空气和真空彻底去除,至无丁酯味为止,防止跑料。 7.结晶:晶体成核可分为初级成核(没有待结晶物质以晶体形式存在)和二次成核(已有待结晶的物质以晶体形式存在)两类。 螺旋霉素晶核大小测量困难,因为结晶过程中成核和晶体生长总是相耦合的,并且没有合适的条件可以保存它。光散射提供了一种估计核大小的有效方法,这种方法简便易行。利用光散射测量单分散性球形颗粒的粒径。 螺旋霉素颗粒的真密度可以使用比重瓶法测量,因为螺旋霉素在正辛烷中的溶解度很小,而且正辛烷的密度较小,因此正辛烷可作为测量的流体介质,通过试验测得螺旋霉素的真密度为 1.10g/cm3。 8.干燥包装:将颗粒在真空干燥箱内真空度为99990Pa以下,水温80℃,每 2 h翻料1次,如有结块必须压碎。干燥时间10 h左右,当水分达到15%以下时停止。干燥后进入最后包装阶段,将干粉分装于8 kg的木桶或3 kg的铁桶内,桶内用3层包装,塑料袋外层为1层牛皮纸,最内一层仍为塑料袋,用绳扎好。 结语 在发酵液中,螺旋霉素的浓度很低,杂质浓度反而比其高出几十、几百倍,还有某些杂质及其结构与抗生素极为相似,这就更增加了提取的难度。发酵液中常含有残蛋白质、脂肪、无机盐、菌丝等,此外还有预处理时加入的硫酸铝、草酸等,成分极其复杂,因此抗生素的提取非常不易。合理地利用提取工艺,不仅可以降低螺旋霉素的生产成本,而且能够有效地提高螺旋霉素的产量。 抗生素结晶的几种常用方法 1)蒸发结晶。使溶液在加压、常压或减压下加热蒸发除去一部分溶剂,以达到或维持溶液过饱和度,使晶体长大。 2)化学反应结晶。加入反应剂或调节pH产生新物质,当该新物质的浓度超过它的溶解度时就有结晶析出。 3)过饱和冷却结晶。使溶液冷却降温以维持一定过饱和度,不用除去溶剂,优点是能耗小设各构造及操作较简单,但生产速率和产率相应较低,难以自动控制。 4)盐(溶)析结晶。加一种物质于溶液中,以便溶质的溶解度降低形成过饱和溶液而结晶。 谢谢观看
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