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重组复制型溶瘤腺病毒p53的质量控制方法Qualitycontrol-药学学报
1476 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 11, 46 ( 12) : 1476 1482
重组复制型溶瘤腺病毒p53 的质量控制方法
凯, 毕 华, 丁有学, 李永红, 韩春梅, 郭 莹, 饶春明*
( 中国食品药品检定研究院, 北京 100050)
摘要: 建立重组复制型溶瘤腺病毒p53 (SG600-P53) 的质控检测方法与质量标准。采用限制性内切酶酶切、
PCR 法对端粒酶启动子、低压缺氧调控元件融合的巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 启动子、p53 基因等重
组病毒载体结构进行分析, 鉴定结果均与理论值相符。经紫外吸收法 (A260) 检测, 病毒颗粒数为 2.0×1011
VP ·mL 1; TCID50 法测定感染活性为5.0×1010 IU·mL 1。p53 蛋白ELISA 检测结果表明, 重组病毒体外感染人肺癌
细胞H 1299 后, 感染组核蛋白和空白对照组A450 吸收度之比为5.2。该基因治疗制剂对人肺癌细胞A549 体外杀
伤的MOIIC50 为1.0。以相同MOI 感染并经TCID50 法检测, 重组病毒在人肺癌细胞A549 与人 皮成纤维二倍体
细胞BJ 的增殖比值为398 。经阴离子高效液相色谱分析, 病毒载体颗粒纯度为99.5% 。定量PCR 检测 明在1×107
VP 的病毒颗粒中, 野生型腺病毒基因片段少于1 个拷贝。本研究建立的重组复制型溶瘤腺病毒的质量标准与检
测方法, 可用于该制品的质量控制, 同时也为其他溶瘤基因治疗病毒载体质控研究提供参考。
关键词: 腺病毒载体; 肿瘤溶瘤基因治疗; p53 基因; 质量控制
中图分类号: R917 文献标识码:A 文章编号: 05 13-4870 (20 11) 12-1476-07
Quality control of recombinant oncolytic adenovirus/p53
*
GAO Kai, BI Hua, DING You-xue, LI Yong-hong, HAN Chun-mei, GUO Ying, RAO Chun-ming
(National Institutes of Food and Drug Control, Beij ing 100050, China)
Abstract: To establish a detection method of oncolytic adenovirus/p53 and standard of quality control,
human telomerase reverse transcriptase (hTERT) promoter, CMV fusion promoter containing hypoxia reaction
element (HRE) and p53 gene were identified by vector DNA restriction enzyme digestion and PCR analysis. The
result conform
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