微生物佐剂.docVIP

免疫佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类单独使用时一般无免疫原性，但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性，增强机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质。1925 年，法国兽医免疫学家Ranmon 发现疫苗中某些物质的佐剂作用，1926 年Glenny 证明明矾具有佐剂作用，1951 年Freund 研制成弗氏佐剂。目前我国对蜂胶佐剂、油乳佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂等新型佐剂的研究也有迅速发展。 常用的免疫佐剂的种类有传统佐剂【铝盐佐剂、油性乳剂、微生物佐剂、天然来源及中草药佐剂、蜂胶、免疫刺激复合物（ISCOMs）、多糖、糖苷及复方中药】、DNA 疫苗佐剂【细胞因子、γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、共刺激分子、CpG DNA、脂质体】。 1 免疫佐剂的作用机理 1.1 提高抗原物质免疫活性某些佐剂颗粒表面可吸附抗原，使其表面积明显增加，特别是可溶性抗原或半抗原，经吸附后可产生较高抗体滴度。 1.2 延长抗原在体内存留时间，如矿物胶体、乳剂类佐剂等可在注射部位形成抗原储池，以延缓抗原释放速率，延长免疫反应，增加免疫记忆细胞数量。Nicoll等的试验中，以PBP为佐剂制备的疫苗接种后形成的局部抗原储池在疫苗接种部位至少可存在1 年以上。 1.3 对单核巨噬细胞的作用，如短小棒状杆菌、葡聚糖等免疫佐剂可激活免疫细胞，尤其是巨噬细胞等抗原提呈细胞（APC），刺激其产生白细胞介素1、4 （IL-1、IL-4）、干扰素（IFN）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等细胞因子，提高免疫细胞局部浓度，促进APC 表面组织相容性复合体Ⅱ类基因（MHC-Ⅱ）表达，提高APC 抗原递呈功能。 1.4 对T 细胞的作用 不同佐剂因病原体相关分子模式（PAMP）不同，提供的激活信号不同，诱导APC 向不同方向分化，如革兰阴性菌的脂多糖（LPS） 促进树状突细胞（DC） 向DC1 亚类分化， 线虫中含磷酸胆碱的糖蛋白诱导DC 向DC2 亚类分化。它们通过调节DC 的成熟分化进一步控制甲状腺素（Th） 细胞分化，当DC分化为DC1时，分泌L-12 或/和L-18 等，刺激Thp 向Th1 亚类分化，DC2 和L-4 则在Th2 分化中起重要作用。此外，尚有人提出第3 类调节T 细胞（Th3 或Tr1）， 它通过L -10 和转化生长因子β（TGF-β）调节Th1 应答［3］。此外，佐剂还可通过上调或抑制APC 与T 细胞间的共同刺激信号来调节天然免疫应答向获得性免疫应答转化。 1.5 对B 细胞的作用，如LPS、聚蔗糖（Ficoll）可调节B 细胞表面Ig受体，使B 细胞活化增殖，并诱导B 细胞对Th 细胞的敏感性，加强免疫应答，提高抗体水平。 1.6 表面活性剂免疫刺激复合物（ISCOMS）、脂质体（LIP）等佐剂具有载体功能，可改变抗原物理状态以及它们与免疫系统的作用方式， 使抗原易于被APC 吞噬，并使抗原易于进入淋巴系统。例如，LIP 易与抗原递呈细胞膜融合的特性，可促进APC 吞噬脂质体中的抗原。另外，由于抗原被集中在佐剂系统的微粒表面或内部， 所以抗原达到有效作用浓度的机会增加；对于B 细胞而言，将可能提高免疫球蛋白受体聚集度。 1.7 非特异性免疫增强作用于NK 细胞和K 细胞的活性如糖萜素、香菇多糖等能刺激机体产生IFN 和IL-2 等细胞因子，构建非特异免疫防御系统；能提高正常和免疫抑制状态下自然杀伤（NK）细胞和巨噬细胞活性，抵抗病原微生物入侵和抗感染；能促进T 细胞增值和CD4 +和CD8+T 细胞亚群分化成熟，提高T 淋巴细胞转化率， 增强白细胞吞噬功能；能有效提高C3b 受体花环率，提高免疫球蛋白含量等。 2. 微生物佐剂 微生物佐剂主要有脂多糖、分枝杆菌等。脂多糖佐剂早在1956 年就有报道。它存在于革兰氏阴性杆菌的细胞壁中，是聚阴离子型两通路分子，是由一种独特的疏水脂连接至很长的重复多糖链组成。试验证明，脂A 区具有LPS 的主要生物学活性包括佐剂活性， 但值得注意的是LPS 具有很强的毒性，使用前应减小其毒性。LPS 的作用方式目前尚未清楚。分枝杆菌在兽医中广泛地应用于疫苗，如牛分枝杆菌卡介苗是早期应用成功的一种。分枝杆菌经化学和物理方法处理，可获得具有佐剂活性的片段，包括胞壁酰二肽（muramyl dipeptide，MDP）、胞壁酰三肽（muramyltripeptide，MTP）、蜡质D 等，其中对MDP、MTP 研究的较多。MDP 是从分枝杆菌细胞壁上提取的一种免疫活性件，适合胚胎干细胞的生长、发育。MDP及其衍生物的免疫药理作用非常强,可以替代分枝杆菌应用于弗氏完全佐剂。MDP及其现有衍生物中的绝大多数都是致热原,所以尚不能用于人类疫苗。MDP丁酯和苏