人近曲肾小管上皮细胞缺氧／复氧损伤模型的建立-中华危重病急救医学.PDFVIP

维普资讯 中国危重病急救医学 2005年 1O月第 17卷第 1O期 ChinCritCareMed，Oct．2005，Vo1．I7，No．10 · 619 · · 论 著 · 人近曲肾小管上皮细胞缺氧 ／复氧损伤模型的建立 杜逸亭 董文斌 王明勇 航永伦 【摘要】 目的 建立一种新的人近 曲肾小管上皮细胞HK一2缺氧 ／复氧损伤模型。方法 本实验使用人 近 曲HK一2。实验分为缺氧4、12和 24h及缺氧 24h后复氧 4、12和 24h组，每个实验组均设立空 白对照组。 采用经高温灭菌的液体石蜡覆盖法造成缺氧环境 ；苔盼兰摄取法进行细胞计数及检测细胞存活率，生化法检 测培养基中的乳酸脱氢酶 (LDH)含量。结果 人肾小管上皮细胞经过缺氧 ／复氧处理后 ，苔盼兰摄取率显著 提高，细胞存活率显著下降，LDH含量升高。说明缺血一再灌注损伤导致了细胞膜的完整性破坏，甚至细胞发 生了不可逆转的损伤。结论 采用液体石蜡覆盖法建立人近 曲肾小管上皮细胞缺氧 ／复氧损伤模型，较其他 制模方法操作简单、易行、可靠 。 【关键词】 缺氧； 复氧； 肾小管上皮细胞； 细胞模型 Replicationofamodelofinjurytohumanrenalproximaltubularcellsinducedbyhypoxia／reoxygenation DU Yi—ting ，DONGWen—bin，WANG Ming—yong，HANG Yong—lun． DepartmentofNeonate。 AffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege，Luzhou646000，Sichuan，China [Abstract] Objective Toreplicateanew modelofinjury tOhumanrenalproximaltubularcells (HK一2)inducedbyhypoxia／reoxygenation．Methods HumanrenalproximaltubulareelllineHK一2eell wasused asthetargetcel1．Tubularcellsweredivided intosixgroups：4 hoursofhypoxia，12hoursof hypoxia，24hoursofhypoxia，and 24hoursofhypoxiafollowedbyreoxygenation4，12or24hourslater groups． Each group wasaccompanied by acontrolgroup．Hypoxicculture conditionswere produced by coveringtheculturewithliquidparaffin．Trypanblueexclusionwasusedforeellcountandeellviability．The activity oflactatedehydrogenase (LDH )in the culturemedium wasdetermined by biochemicalmethod． Results After being challenged by hypoxia followed by reoxygenation，trypan blueexclusion rate was greater，eellcountandeellviabilitywerelower。andtheactivityofLDH wasincreased．Itindicatedthatthe destructionofintegralityofcellularmembranewasinducedbyischemia／reperfusioninjury，andthetubular cellsmaybeinjuriedirrexersibly．Conclusion： A simplemodelofhypoxicinjuryofrenaltubularcellsis replicatedbycoveringtheculturecellswith liquidpar