实验五-大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.pptVIP

实 验 目 的 了解转化的概念及其在分子生物学研究中 的意义。 学习将外源质粒DNA转入受体菌细胞及筛 选重组子的方法。 实 验 原 理 转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌细胞，并使其生物学特性发生可遗传的变化的过程，是基因工程等研究领域的基本实验技术。 转化的方法： (1)化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞，通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞； (2)电转化法：使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞，通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。 实 验 原 理 用CaCl2处理大肠杆菌细胞使其处于感受态后，通过热激处理可将质粒转化进入细菌中。进入细菌细胞的质粒能够自主复制并在宿主中实现其携带基因的转录、表达。 实 验 原 理 实 验 原 理 转化体的筛选方法： 主要用不同抗生素基因筛选。 常用的抗生素有：氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素等。 实 验 原 理 如果将转化后的菌液涂在无选择性抗生素的培养基平板上，会出现成千上万的细菌菌落，将难以确认哪一个克隆含有转化的质粒。将经过转化后的细胞在选择性抗生素培养基中培养，才能较容易地筛选出转化体，即带有异源DNA分子的受体细胞。 实