枸杞多糖的提取分离纯化.pptVIP

同学们好 枸杞多糖的提取、分离纯化及其构成 枸杞 果实含枸杞多糖，甜菜碱、阿托品、天仙子胺；另含玉蜀黍黄素、酸浆红素、隐黄质、东莨菪、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生素B1、 B2及C． 有增强非特异性免疫作用 、延缓衰老作用 、抗肝损伤 、降血糖 、补肾功能 、保肝功能 、抗脂肪肝作用 、对血压的作用 、抗疲劳作用 、抗肿瘤作用 。 枸杞多糖 枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相对分子质量为68-200，成为国内外研究热点。其中又以枸杞多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的研究最多。现已有很多研究表明枸杞多糖具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用。 实验研究过程 材料预处理及提取方法 Sevage法脱蛋白 枸杞多糖的分离 枸杞多糖的纯化 成分分析结果 材料预处理 (1)粉碎 将枸杞子洗净晾干，再放入烘箱供至干透(烘箱温度50℃，避免温度过高使之焦糊)。烘干后取出，冷却至室温，然后用粉碎机将干燥的枸杞子粉碎，备用。 (2)脱脂 将粉碎的枸杞粉末置于大烧杯中，加入4倍体积95%的乙醇，60℃水浴加热搅拌脱脂2小时，滤去乙醇，重复脱脂3次，收集滤渣，晾干，装袋备用。 枸杞多糖的提取 热水提取法：称取150g干燥滤渣加入3000mL蒸馏水，90℃热水提取2小时，重复2次，合并离心，收集上清液。利用旋转蒸发仪浓缩至1/4体积，然后加入4倍体积的95%乙醇，静置过夜。离心，收集沉淀并重复醇沉一次，即得水提粗糖。 Sevage法脱蛋白 Sevage法：正丁醇、氯仿混合溶液（正丁醇：氯仿=1：4或1：5）和样物提取液混合并且振荡，不需要加热利用离心机离心，直到离液面交界处无白色混悬，也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处 ，然后分别提取。 分别取一定量上述水提粗多糖，用蒸馏水完全溶解，得多糖水溶液。采用Sevage法脱蛋白，加入多糖水溶液体积1/5的Sevage试剂(三氯甲烷：正丁醇=4：1)，震荡20min后离心，收集上清液，弃去中间变性蛋白和下层三氯甲烷，重复操作至中间无变性蛋白层出现。将上清液对流水透析3天，真空冷冻干燥得水提脱蛋白枸杞多糖WLBP。 枸杞多糖的分离 酸性亚组分的分离 取WLBP4.0g溶于75mL蒸馏水中，加入50mL十六烷基三甲基溴化铵，过夜沉淀12h，然后以4000r/min、4℃离心20min，收集沉淀。沉淀用10%NaCl溶解后，加入3倍体积95%乙醇，产生沉淀，4000r/min、4℃离心20min收集沉淀，蒸馏水溶解并透析3天，冻干得WLBP。 枸杞多糖的纯化 枸杞多糖的纯化釆用SephadexG-150色谱柱层析法纯化多糖样品。填料为SephadexG-150葡聚糖凝胶，层析柱规格为2.5×50cm，用蒸馏水洗脱。选取冻干后的WLBP组分40mg溶于5mL蒸馏水中，上SephadexG-150色谱柱，用蒸馏水洗脱，自动收集每管3mL。用苯酚-硫酸法检测多糖含量，合并出峰管，浓缩，冻干，得纯化多糖WLBP-I、WLBP-II 成分分析结果 经高效气相色谱分析得出出峰时间表 气相色谱图 六种单糖的摩尔比为鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=2.07：2.38：3.11：1.00：1.12：2.86。 多糖的环境扫描电镜照片 谢谢 再见 * * * … … … … … * *