植物组织培养技术实验指导书.docVIP

《植物组织培养技术》实验教学准备工作 一、? 配制母液所需药品、器材 1、 Ms成分19种（N6同） 2、蔗糖 3、琼脂 4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等） 电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、角匙、母液瓶（棕色）、蒸馏水 二、无菌室所需物品 1、95%酒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高锰酸钾、紫外灯、工业酒精 2、枪式镊子（16 cm,20cm）、尖镊（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、 药棉、纱布、火柴 ? 3、?广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿 三、学生配制培养基、分装、高压灭菌所需器具 1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）(15mm*145mm试管) 2、电炉 3、烧杯（1000ml）移液管（ 10ml、5ml、2ml、1ml）、吸球 4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水 、纸 5、pH值精密试纸（5.4-7） 6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸馏水、牛皮纸、棉绳 7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒 四、消毒剂（处理外植体） 升汞（氯化汞）、酒精、漂白粉、双氧水、次氯酸钠 实验一、 Ms培养基的配制、分装和灭菌? 植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第二个因素就是培养基。应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。 另外植物组织培养是?在无菌条件下培养植物的技术。要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。 ? 一、目的要求???? 学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品 1、仪器? ? 高压灭菌锅、天平、电炉 2 、玻璃器皿??烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸? 3、药品与试剂??? Ms母液（见表1-1） 氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2，4-D（1mg/ml）、NAA（1mg/ml）、蒸馏水三、实验方法（一）、培养基的配制 配制培养基前要先配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四大类。（用量详见 表1-1）。1、大量元素母液（20倍液） 分别称取20倍用量的各种大量无机盐，要一种药品完全溶解后加入下一个药品，依次溶解于约600ml热的（50oC）蒸馏水中。（CaCl2.2H2O ）另外溶解后与前溶解的药品，加水定容至1000ml装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。 2、微量元素母液（100倍） 附表1-1 MS培养基母液的配制 (单位：mg) 类 别 成分 培养基浓度(mg/L) 1升母液称取量(mg) 母液体积(ml) 母液扩大倍数 每升培养基取母液的量(ml) 大 量 元 素 1 CaCl2.2H2O 无水（CaCl2） 440 332 8800 6640 1000 20倍 50 KNO3? MgSO4.7H2O NH4.NO3 KH2 PO4 1900 370 1650 170 38000 7400 33000 3400 微 量 元 素 2 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 22.3 8.6 6.2 0. 83 0. 25 0. 025 0.025 2230 860 620 83 25 2. 5 2.5 1000 100倍 10 铁 盐 3 Na2.EDTA FeSO4.7H2O 37.25 27.85 3725 2785 1000 100倍 10 有 机 物 4 甘氨酸 盐酸硫胺素 盐酸吡哆素 烟酸 肌醇 2 4 5 5 100 100 20 25 25 5000 500 50倍 10 分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于约600ml重蒸水中，加水定容至1000ml。冰箱内贮存备用3、铁盐母液（ 100倍） 称取100倍用量的Na2.EDTA（乙二胺四乙酸钠）、FeSO4.7H2O溶于600ml重蒸水中，加水定容至1000ml。冰箱内贮存备用。4、有机物质母液（ 50倍）  分别称取50倍用量的各种有机物质，依次溶解于400ml重蒸水中，定容至500ml；装入棕色瓶中贮存于冰箱里。5、生长素 如2，4-D、IAA、NAA等。准确称取20mg，先用2ml 95%乙醇溶