肿瘤基因治疗综述.docVIP

肿 瘤 基 因 治 疗 综 述 生物工程09-1班 殷雨婷 肿瘤基因治疗 摘要：随着分子生物学、分子遗传学、免疫学等相关学科的发展和渗透，基因治疗特别是肿瘤基因治疗技术迅速发展。肿瘤基因治疗就是将一段特定的遗传信息物质DNA或RNA通过人工方法导入肿瘤细胞以治疗肿瘤性疾病。基因治疗的靶向性是值得密切关注的问题之一，如何寻找合适的靶分子是基因治疗肿瘤的重要方向。本文主要对肿瘤基因治疗的构建、目的基因的靶向性以及内容、应用等方面做了综述。 关键词：基因治疗；基因免疫；基因的靶向性；肿瘤细胞。 1.构建含有抗肿瘤基因的DNA载体 1.1主要步骤 获得合适的抗肿瘤编码基因并将它插入到载体DNA上，是发展肿瘤基因治疗的一个主要工作。 1.2目的基因的获取 表达文库免疫技术，提供了一种在各种已知或未知病原体基因组中获得目的基因的系统而普遍有效的方法。该技术根据病原体的所有抗原都由其DNA 编码这一基本原理，将病原体基因文库中的病原体DNA片段插入特定的质粒中，利用基因免疫的方法筛选病原体基因组中具有免疫保护功能的基因片段。目前，基因表达文库免疫技术是发现目的基因的一种最系统、客观的手段。 1.3载体的构建 质粒载体必须是能在大肠杆菌中高拷贝地扩增，而在动 物细胞内则能高效表达，但不复制，也不含有向宿主细胞基 因组内整合的序列。常用的质粒载体启动子多为来源于病毒基因组的巨细胞。 1.4目的基因的导入 1.4.1间接体内法 间接体内法是指在体外用基因转染肿瘤细胞，然后将经转染的肿瘤细胞输入病体内，最终给予病体的疗效物质是基因修饰的细胞。 1.4.2直接体内法 1.4.2.1定义：直接体内法是指基因片段或完整基因直接注入体内进行治疗的办法。 1.4.2.2裸DNA直接注射：将裸质粒DNA 直接注射到机体的肌 肉、皮内、皮下、粘膜、静脉内。这种方法简单易行。 1.4.2.3脂质体包裹DNA直接注射：包裹DNA的脂质体能与组织细胞发生膜融合，而将DNA摄入，减少了核酸酶对DNA的破坏。注射途径类似裸DNA直接注射。 1.4.2.4金包被DNA基因枪轰击法：将质粒DNA包被在金微粒子表面，用基因枪使包被DNA的金微粒子高速穿入组织细胞。 1.4.2.5繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法：选择一种容易进入某组织器官的细菌，将其繁殖基因去掉，然后用质粒DNA转化细菌，当这些细菌进入某组织器官后，由于能繁殖，则自身裂解而释放出质粒DNA。 1.4.2.6经改造的mRNA法：将目的基因的mRNA结构进行重组后直接送入体内。 2.目的基因转移的靶向性 2.1病毒介导的靶向基因转移 目前用于基因转移的病毒载体有逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体和单纯疱疹病毒载体等，但它们对细胞的感染均无选择性。逆转录病毒的趋向性由其外壳包膜蛋白env 和宿主细胞表面特异的蛋白受体间相互作用决定，因此，可通过修饰env 基因或env蛋白来改变其感染谱。用能识别肿瘤细胞受体的配体或抗肿瘤特异性抗原的抗体基因取代env基因部分序列，使病毒表达能特异性识别肿瘤细胞的外壳蛋白，从而将目的基因靶向性地导入肿瘤细胞。有人用抗人癌胚抗原（CEA）单链抗体的基因与env重组，使逆转录病毒把一氧化氮合酶（NOS）“自杀基因”靶向导入CEA阳性的肿瘤细胞，并合成NOS使其自杀身亡，而对非靶细胞则无损伤。 2.2受体-配体或抗原-抗体介导的靶向基因转移 许多细胞表面都特异性地表达或过表达某种受体或抗原，如果使目的基因或携带有目的基因的载体与相应的配体或抗体相连接，利用受体-配体或抗原-抗体相互作用的特异性，就可以把目的基因特异性地导入到靶细胞中 3肿瘤基因治疗 3.1肿瘤基因治疗免疫反应 3.1.1免疫反应 基因免疫能引起多种免疫反应：一是体液免疫反应，在绝大多数基因免疫试验中，都能得到编码蛋白的特异性抗体，抗体主要类型为IgG,；二是细胞毒T淋巴细胞免疫反应，基因免疫在抗原提呈细胞内表达的编码蛋白，经过提呈，诱导细胞毒T淋巴细胞产生；三是辅助T细胞反应，基因免疫能激发辅助T细胞的增殖，并伴有细胞因子的分泌，主要的细胞因子为白介素-12[1]和干扰素，属典型的Th1 型辅助T细胞反应。还有些试验还发现，基因免疫还有辅助T细胞参与的免疫记忆效应。 3.1.2治疗方法 针对免疫应答细胞的治疗：用细胞因子基因转染抗癌免疫应答细胞(如TIL、CTL)可增加其抗癌活性，可供选择的目的基因有白介素(IL-1、2、4、6、12等)、干扰素(IFNα和β等)、TNF、集落刺激因子(G-CSF、GM-CSF)等. Rosenberg et al［1］将TNFα基因导入带有标记基因(NeoR基因)的TIL细胞中，使TIL的杀瘤