猪乙脑rt-pcr快速诊断方法的建立.docVIP

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2017-08-18 发布于重庆
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猪乙脑rt-pcr快速诊断方法的建立

猪乙脑RT-PCR快速诊断方法的建立建立了检测的RT-PCR方法图1 乙型脑炎病毒RT-PCR特异性测定（M为DNA Marker DL/2000，1为JEV,2为CSFV，3为PRRSV） 2.2 RT-PCR灵敏性检验将病毒培养液作依次作10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀释，然后进行RT-PCR扩增。结果显示，10-3、10-4、10-5和10-6稀释浓度RT-PCR扩增结果均为阳性，但DNA条带亮度逐渐降低，10-7稀释度RT-PCR扩增结果为阴性。根据cDNA模板的原始浓度推算，检测JEV的RT-PCR的最小灵敏度能够达到纳克(ng)级别。 2.3 RT-PCR临床应用效果运用建立的RT-PCR检测技术，从67份临床病猪样品中检测出8份乙脑病毒阳性样品，阳性率为11.9%；从53份猪场周围收集的蚊虫样品中检测出2份乙脑病毒阳性样品，阳性率为3.8%。建立猪乙型脑炎病毒快速诊断技术通过进行RT-PCR特异性检验、RT-PCR灵敏性检验和RT-PCR临床应用等工作，证明对乙型脑炎病毒具有较高的特异性，根据cDNA模板的原始浓度推算，检测JEV的RT-PCR的最小灵敏度能够达到纳克(ng)级别。临床应用效果良好。 3. 结论建立猪流行性乙型脑炎(JEV)快速诊断技术，用于猪流行性乙型脑炎的流行病学分析。运用自行设计的特异性引物，运用RT-PCR技术，能够在6h内准确判定JEV，具有灵敏、准确、快速的特点。 M 1 2 3