植物组织培养笔记111.docVIP

第一章 绪论 植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。 植物组织培养类型:1、完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较小植株等的培养。2、胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。 3、器官培养（Organ Culture）包括离体根、茎、叶、果实、种子、花等 器官的培养。4、组织培养（Tissue Culture）如分生组织、薄壁组织、输导组织、愈伤组织培养。5、细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。6、原生质体培养（Protoplast Culture）指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。 组培的一般过程：初代培养—继代培养—生根培养—驯化培养 植株的再生途径：1）器官发生途径（Organogenesis）：植物器官可以直接由外植体上诱导。如茎尖培养。间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程2）体细胞胚胎发生途径（Somatic embryogenesis）: 体胚发生途径是指二倍体或单倍体的细胞在特定条件下，未经性细胞融合而产生与合子胚结构、功能类似的胚的过程。经体胚发生形成类似合子胚的结构称为胚状体（embryoid）或体细胞胚(somatic embryo). 组培的应用：1、优质种苗的快速无性繁殖：1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快繁 2）通过茎尖培养生产脱毒种苗2、用于植物遗传育种：种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；离体授粉克服远缘杂交不亲和性；胚培养拯救杂种胚；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质；4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 组培的生理依据1、植物细胞的全能性2、激素在分化过程中的作用:在分化过程中合适的激素配比在器官分化有重要作用。 实验室的设备和操作 完整的植物组织培养实验室通常包括：准备室（用于培养器皿的清洗、干燥、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等）接种室（接种材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。保持洁净，与化学实验室之间设缓冲室）培养室（主要用于植物材料的培养。 要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度，以促进植物材料的生长和分化。）、温室 无菌操作：1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，以减少污染源。5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。 植物消毒程序：1）清洗（流动自来水冲洗数小时，洗衣粉毛刷等清洗）；2）灭菌剂浸泡灭菌；3）无菌水清洗4、5次擦干；4）加表面活性剂（吐温-20或吐温-80，加强表面活性剂，磁力搅拌，超声振荡）。 培养基的成分主要有：水、无机盐、有机化合物、生长调节物、天然附加物、支持物 植物激素植物代谢中产生的天然化合物，直接影响植物细胞的分化、分裂以及影响植物的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌发等活动。通过植物激素及生长调节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚胎发生等。生长素类：细胞分裂类：赤霉素类：脱落酸：多胺乙烯： 肌醇（环己六醇）：适当使用肌醇，促进愈伤组织生长及胚状体和芽形成。促进组织和细胞繁殖、分化，对细胞壁形成 MS培养基：1高盐培养基2元素平衡好，缓冲能力强3微量元素有机成分丰富4目前应用最广 B5培养基：低盐培养基。特点是含有较低的铵，因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。 配制母液原则：相同类型试剂混合；易形成沉淀的药品分开；母液浓度要适宜；用量要认真计算和核对；药品要准确称量。 培养基的配制：0母液配制与保存1取出母液按顺序放好，将有机营养溶化待用2取烧杯一只，放液约三分之一，放入木业并不断搅拌3加入生长调节剂和蔗糖4给定容的培养基加入琼脂，加热溶解5调ph 6分装7灭菌，高压灭菌锅121°15~20min8待温度降到50°以下，取出冷却凝固待